遲發型變態反應（DTH）檢測：足跖增厚法

綿羊紅細胞（SRBC）誘導小鼠DTH（足跖增厚法）
 
一、原理
 
SRBC可刺激T淋巴細胞增殖成致敏淋巴細胞，4天后，當再以SRBC攻擊時，即可見攻擊部位出現遲發型變態反應。
 
二、材料
 
游標卡尺（精密度0.02mm）、SRBC、微量注射器（50μL）。
 
三、實驗步驟
 
（1）致敏
 
小鼠用2%(v/v)SRBC腹腔或靜脈免疫，每只鼠注射0.2mL（約1×108個SRBC）。
 
（2）DTH的產生與測定
 
免疫后4天，測量左后足跖部厚度，然后在測量部位皮下注射20%(v/v)SRBC，每只鼠20μL（約1×108個 SRBC），注射后于24h測量左后足跖部厚度，同一部位測量三次，取平均值。
 
四、數據處理和結果判定
 
一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值< F0.05,結論：各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
 
以攻擊前后足跖厚度的差值來表示DTH 的程度。受試樣品組的差值顯著高于對照組的差值，可判定該項實驗結果陽性。
 
五、注意事項
 
測量足跖厚度時，最好由專人來進行。卡尺緊貼足跖部，但不要加壓，否則會影響測量結果。
 
攻擊時所用的SRBC要新鮮（保存期不超過1周）。