質粒DNA的小量制備實驗——

DNA

LB培養基卵清溶菌酶異丙醇TE

離心機漩渦混合器水浴鍋

一、實驗步驟

1.  接種一個單菌落于5 ml 培養基中，于37℃培養至飽和狀態。

2.  取1. 5 ml 菌液離心20 s 加入300 ul 200 ug 溶菌酶的STET溶液，在旋渦混合器 上振蕩混勻，冰上放置30 s~10 min。

3.  將管放入沸水中（100℃）1~2 min 離心15~30 min，吸出上清移入一個新的微量離心管中。
 

4.  加入200 ul預冷的異丙醇，于-20℃放置15~30 min。

5.  離心5 min，棄上淸，真空干燥。

6.  沉淀溶于50 ul TE緩沖液中，保存，取進行限制性酶切分析。

二、質粒DNA保存

1.  短時間保存可將選擇培養基上的菌落保存于℃；長時間保存可將菌液-70℃保存于甘油或DMSO溶液中。

2.  從保存在選擇平板上挑取菌落進行培養，并通過限制酶分析檢測質粒。

3.  溶于TE緩沖液的質粒DNA可在4℃短時間保存，并可于-20℃或-70℃長時間保存。