質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗——電轉化法

外源片段與載體的連接產物大腸桿菌感受態細胞

X-galAmpLA培養基水抗生素

培養皿滅菌鍋離心管搖床

1.  l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（100 mg/ml），250 ml 制備選擇性培養基平板：在融化的250 ml LA培養基中250 mI PTG (200mg/ml)，混勻后倒入滅菌培養皿中；

2.  取出制備好的感受態細胞，放在冰上融化；

3.  連接產物，用移液器輕輕吸打均勻，置冰上；每管感受態細胞加入1 μl

4.  電轉化儀選擇1800 V作為輸出電壓；

5.  將要轉化的混合物加入預冷的1 mm的電轉化杯中，立即按下按紐電擊；

6.  立即加1 ml SOC培養基到轉化杯中重懸細胞；

7.  將細胞轉入合適的培養管中37 ℃培養1小時；

8.  吸取合適體積的菌液涂布已倒好的選擇培養基平板；

9.  37 ℃培養過夜，觀察結果。