原理:高效液相色譜法是由于溶質在同定相和流動相之間的分配系數、親和力、分子大小、吸附能力等不同,而進行連續分離的過程。
操作步驟:
①色譜條件
色譜柱:Kromasil C18柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm) 。
流動相:磷酸二氫鈉和辛烷磺酸鈉混合溶液(磷酸二氫鈉3.0 g、辛烷磺酸鈉1.0 g,加水溶解并定容至500 mL,用磷酸調溶液pH為3):乙腈 = 96:4(體積比)。
檢測波長:210 nm,流速0.8 mL/min,柱溫30℃,進樣量10 μL 。
②制作標準溶液
準確稱取谷胱甘肽標準品適量,用去離子水溶解于容量瓶中,混合均勻,定容,制成25 μg/mL、50 μg/mL、100 Vg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列濃度樣品液,作為標準溶液。
③樣品制備
準確稱取谷胱甘肽樣品,加去離子水,混合均勻,制成濃度為25 ~ 800 μg/mL的樣品溶液,作為分析溶液。
④繪制標準曲線
將配置的谷胱甘肽標準液,分別吸取10 μL進樣測定,以谷胱甘肽谷胱甘肽生產技術濃度和峰面積繪制其標準曲線,根據標準曲線得出該曲線的回歸方程。峰面積的變化應與谷胱甘肽的質量濃度呈線性關系,其擬合度應達0.9995以上。
⑤樣品的測定
取谷胱甘肽樣品分析液10 μL,用高效液相色譜儀進樣測定,得到樣品溶液的峰面積,根據回歸方程計算出谷胱甘肽的含量。