主要依靠病原菌的分離。最好在床邊或手術臺旁抽出膿液直接注入培養基中﹐以減少因送標本的過程中暴露在有氧的空氣中而使分離失敗。某些醫院還缺乏培養厭氧菌的設備﹐所以診斷完全依據臨床數據﹐如有臭味的膿液或分泌物﹑壞死組織﹑病變處氣體形成﹑特殊部位的膿腫(如牙周﹑肺﹑腦的膿腫)﹑普通培養陰性時應考慮有厭氧菌感染的存在。