1． 原理：聯苯胺在酸性溶液中和過氧化氫與血紅蛋白作用可以生成氧化聯苯胺并產生由綠至蘭最后形成紫紅色的一系列顏色反應。根據所呈顏色反應測定血漿中血紅蛋白的濃度。
2． 試劑：
2．1聯苯胺醋酸液：取聯苯胺1克放于是100ML容量瓶中，加D.W25ML加溫促溶解。待微冷卻后，滴加冰醋酸至刻度；混勻，放入棕色瓶中，冰箱保存備用。
2．2 0.3％雙氧水：取30％雙氧水0.1毫升加9.9毫升D.W(必需新鮮配制)。
2．3標準血紅蛋白液的制備(見HP)：用已知準確濃度的標準血紅蛋白液稀釋成,0.2克/L,0.1克/L,0.05克/L標準血紅蛋白液。
3．操作：
| R S1(200mg%) S2(100mg%) S3(50mg%) B 樣 本 0.01 標 準 0.01 0.01 0.01 D W 0.01 1％聯苯胺醋酸 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0．3％雙氧水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 |
加蓋放入37℃20分鐘后再加入10%醋酸5ML;混勻;用B管調0;波長500nm
4．計算：
F-Hb(mg%)={(200+100+50)/3／(S1+S2+S3)}×R={175／(S1+S2+S3)}×R
5． 正常參考值：F－Hb：0~50mg/L。
6．注意事項：
6．1 一切溶器避免血紅蛋白污染。
6．2 取血器皿要干燥；采血要順利，切忌人為溶血。（如有氣泡；注入過快等）。
6．3 注意避免硫離子或醚、硅混入，否則會產生混濁。
6．4 雙氧水要新配，濃度要準確，聯苯胺醋酸液的含水量＞15％＜30％。
7．臨床意義：血漿游離血紅蛋白增加的血管內溶血的指征。Hb超過血流中的結合珠蛋白的結合能力時，血漿游離血紅蛋白便增加。如蠶豆黃、PHN、陣發性寒冷性Hb尿、冷凝集綜合征及其它微血管病性溶血性貧血。血管外溶血則可正常。