蛋白質的電轉實驗

蛋白質

轉移緩沖液甲醇電極緩沖液

電轉移槽電泳儀

1.  剪6塊3 MM 濾紙和一塊NC膜。

2.  將剪好的3 MM 濾紙和NC膜在轉移緩沖液中浸泡3-5分鐘。

3.  按下列過程安裝轉移裝置，將塑料支架平放在含轉移緩沖液的托盤中，在塑料支架上放一塊海綿。

4.  將3塊3MM濾紙對齊放在海綿上，然后依次將NC膜、凝膠、及另3塊慮紙和海綿放上。

5.  用塑料支架夾緊上述各層，放入電轉移槽內，NC膜一側向正極，凝膠一面向負極。

6.  接通電源電壓120 mA，轉移6小時以上或過夜。

7.  轉移結束后，取出塑料支架，依次取掉各層，用鉛筆在膜的上沿作好標記，切下其中一個孔所對應膜的一半，用氨基黑或考馬士亮蘭染色，檢查轉移效果。

8.  將其余的NC膜放在一張干凈的3 MM 濾紙上，室溫干燥30~60分鐘（可不做）。

1.  慮紙及膜的大小不應大于待轉移膠的大小，否則在轉移過程中會發生短路，影響轉移效果。

2.  操作中應戴手套，切不可用手直接觸摸，因手上的汗和分泌物將直接影響到蛋白從膠向膜的轉移。

3.  放置NC膜和濾紙時，每層之間不應有氣泡，否則將影響轉移效果。

4.  待轉移蛋白分子量決定轉移時間，分子量大，轉移時間長，反之則小。