1、總RNA抽提（槍頭和離心管均經過濕熱滅菌，無RNA酶）
1）取勻漿器，加入1ml的Trizol Reagent，置冰上預冷。
2）取100mg組織，加入到勻漿器中。
3）充分研磨直至無可見組織塊。
4）12000rpm離心10min取上清。
5）加入250 μl三氯甲烷，顛倒離心管15s，充分混勻，靜置3min。
6）4℃ 下12000rpm離心10min。
7）將上清轉移到一新的離心管中，加入0.8倍體積的異丙醇，顛倒混勻。
8）-20℃ 放置15min。
9）4℃下12000rpm離心10min，管底的白色沉淀即為RNA。
10）吸除液體，加入75%乙醇1.5ml洗滌沉淀。
11）4℃下12000rpm離心5min。
12）將液體吸除干凈，將離心管置于超凈臺上吹3min。
13）加入15μl無RNA酶的水溶解RNA。
14）55℃ 孵育5min。
15)使用UV1800檢測RNA濃度及純度：儀器空白調零后取2.5μl 待測RNA溶液于檢測基座上，放下樣品臂，使用電腦上的軟件開始吸光值檢測。
16）將濃度過高的RNA進行適當比例的稀釋，使其終濃度為200ng/μl.左右。
2、反轉錄（槍頭和PCR均經過濕熱滅菌，無RNA酶）
1）取一PCR管，加入含2μg RNA的溶液。
2）加入1μl 逆轉錄引物。
3）用無核糖核酸酶的去離子水補足至12μl。
4）于PCR儀上65℃ 保溫5min，迅速置冰上冷卻。
5）依次加入4μl 5×buffer，2μl 10mM dNTPs，1μl RNA inhibitor和1μl 反轉錄酶，用槍抽吸混勻。
6）于PCR儀上42℃保溫60min，結束后80℃保溫5min滅活反轉錄酶。
3、定量PCR
1）取0.2ml PCR管，配制如下反應體系，每個反轉錄產物配制3管。
2× qPCR Mix12.5μl
7.5μM基因引物2.0μl
反轉錄產物2.5μl
ddH2O8.0μl
2）PCR擴增
預變性95℃，10min
循環（40次） 95℃，15s→60℃，60s
熔解曲線75℃→95℃，每20s升溫1℃
4、結果處理
ΔΔCT法：
A=CT(目的基因，待測樣本) -CT(內標基因，待測樣本)
B=CT(目的基因，對照樣本) -CT(內標基因，對照樣本)
K=A-B
表達倍數=2-K