1. 制備腸段 取豚鼠一只,擊頭處死,迅速剖腹,取出回腸,放入盛有臺式液的培養皿中。用注射器吸取臺式液,沖洗腸管至少三遍,將腸內容物清除。剪成約2 cm長腸段備用。
2. 組胺的小腸收縮作用 將腸段兩端結扎,一端固定在浴槽中,另一端固定于換能器上。浴槽中加入15ml臺式液,恒溫在37±0.5℃,通入氧氣。待腸段穩定10 min后,記錄一段基線。然后加入不同濃度組胺溶液(表23-1)。每次加完后,待腸管張力不再增加,方可加入下一次組胺溶液。記錄收縮曲線。
3. 苯海拉明的拮抗作用 用臺式液沖洗浴槽三次,浴槽內溶液仍為15ml,加入10-5 mol/L苯海拉明0.2 ml,待腸管穩定5 min后,依上述方法加入不同濃度組胺溶液,記錄收縮曲線。再次沖洗浴槽,加入5×10-5mol/L苯海拉明0.2 ml,待腸管穩定5 min,依上述方法加入不同濃度組胺溶液,記錄收縮曲線。與上述類似,沖洗浴槽后,加入10-4 mol/L苯海拉明0.2ml,記錄收縮曲線。
4. 計算PA2值 可利用BL-420 微機型生物機能實驗系統計算,亦可使用三點法、Scott比值法進行計算(詳見參考書目)。
(1)先測量組胞各累積濃度的收縮反應強度,然后以效能為百分之百計算
(2)求出各濃度的反應百分率,以組胺終濃度為橫坐標,反應百分率為縱坐標在微機或坐標紙上給出量曲線,從量曲線上分別求出拮抗劑前后激動劑引起50%反應所需約劑量(ED50),代入公式計算PA2值。
PA2=log(E′/E-1)-logB
E′:有拮抗劑時激動劑的ED50;
E:無拮抗時激動劑的ED50;
B:拮抗劑的摩爾濃度。 展開 |