【產品名稱】
通用名稱：苯丙氨酸檢測試劑盒
商品名稱：苯丙氨酸檢測試劑盒
英文名稱：Phenylalanine (PKU) neonatal Screening Assay
【包裝規格】480人份/盒
【預期用途】
此試劑盒可用于新生兒血斑中L-苯丙氨酸的體外定量檢測。僅供新生兒苯丙酮尿癥的篩查。
苯丙酮尿癥(PKU),是一種最常見的氨基酸代謝遺傳病,它通過常染色體隱性遺傳給子代,在人群中的發病率為1/2600—1/25000。
發病的主要原因（90—99%病例）是苯丙氨酸羥化酶的活性降低或缺失。苯丙氨酸羥化酶可以使必需氨基酸苯丙氨酸轉化為酪氨酸，后者是兒茶酚胺、黑色素和甲狀腺激素的前體，由于苯丙氨酸這個代謝的阻斷，因而通過旁路代謝轉化為苯丙酮酸和乙酸鹽，通過腎臟排泄。
該疾病由于在出生后第一周,病人代謝抑制就表現出來。因為蛋白質代謝的改變引起大腦神經纖維異常的髓鞘形成對疾病的發展起主要作用。苯丙酮尿癥的其它表現有真皮（和附屬物）色素沉著的缺乏。是因為黑色素形成的紊亂，因而引起皮膚病。
在新生兒中對苯丙酮尿癥的診斷是重要的,因為可通過低苯丙氨酸膳食避免腦損害。因而測定血中苯丙氨酸濃度的篩查試驗，應在出生后3—5天進行，假如為陽性，應通過檢測染色體特異的突變來進行確證試驗。
為了檢驗苯丙酮尿癥病人發展了許多篩查試驗，最早的試驗是由GUTHRIE 發明命名的，以枯草桿菌的生長習性來檢測，枯草桿菌只能在高苯丙氨酸濃度生長。因為該方法的許多缺陷被其它的一些試驗替代，這些實驗是利用病人血液中的苯丙氨酸參與的化學反應，利用熒光或顯色底物，進行測定。也可以應用更可信、更靈敏、更高級的高壓液相色譜檢測。
【檢驗原理】
將血斑紙上的苯丙氨酸用3%的三氯乙酸從濾紙上洗脫。
樣本中的苯丙氨酸在外加苯丙氨酸脫氫酶的作用下轉化成苯丙酮酸鹽，此反應使存在于反應混合物中的輔酶NAD+再生。產生的NADH 使加入的黃色Tetrazalium 鹽發生氧化還原反應生成紫色物質Formazane，在570nm波長測定OD值，OD值與病人樣本中的苯丙氨酸濃度成正比。
【主要組成成分】
1、試劑盒成分
RE80015 | 標簽 | 成分 |
1× | ENZ LYO | 酶，凍干粉，內含苯丙氨酸脫氫酶，輔酶NAD+，緩沖掖，穩定劑 |
1×45ml | ENZDIL | 酶稀釋液，即用，內含二乙醇胺，緩沖液，0.01%的NaN3 |
1×55ml | SUBS | 底物，即用，內含四唑鹽和檸檬酸鹽。 |
1×5 | CAL A-E | 標準品A～E：1;3;6;12;18mg/dl，用2.EWS進行校準。內含人血液，Schleicher & Schuell濾紙編號：903.15血斑紙片。具體濃度請見試劑瓶標簽或質控單。 |
1×2 | CONTROL 1+2 | 質控品 1+2 質控品1：1.8-3.0mg/dl 質控品2：4.0-6.0mg/dl 內含人血液，Schleicher & Schuell濾紙編號：903.15血斑紙片。具體濃度及可接受范圍請見試劑瓶標簽或質控單 |
1×2ml | DYE CONC | 顯色儲存液，51倍濃縮型，內含酸性黃23（C.I.19140） |
2、實驗需要但試劑盒不提供器材
1）移液器（多道移液器或類似儀器：＜3% CV），體積：25;75;100;600;1000ul。
2）圓底聚苯乙烯試管（12×75mm）
3）試管架
4）試管振蕩器
5）三氯乙酸（3%；w/v），用99.5%的三氯乙酸配得
6）0.5M的NaOH溶液
7）血液采集紙片（建議使用Schleicher & Schuell 903）
8）血斑打孔器，5mm（1/5′′）（例如：Sauer，Hannover，Germany）
9）微孔板（平底）
10） 微孔板振蕩器（300-500rpm，振幅：1.5-3.0mm）
11） 可在570nm讀數的酶標儀（參比波長：690nm）
12） 雙蒸水或去離子水
13） 吸水紙，取樣吸頭和計時器
【儲存條件及有效期】
試劑盒應當儲存于2-8℃的環境下，避免太陽直射，有效期內穩定。樣品的儲存與穩定及試劑的準備將在相關單元中說明。有效期見試劑盒標簽。
【使用儀器】通用酶標儀（配有570nm濾光片）
【樣本要求】
血斑
應當從嬰兒足跟的中部或內測收集足跟血,注意血液采集的常規注意事項.刺破足跟后,第一滴血應當用消毒紗布擦去.將采集卡對準血滴,讓足量的血滲入到吸水紙上并充分填滿預先印好的圓圈。重復操作，將所需數目的血斑都制備好。將血斑室溫下涼干3小時，避免太陽直射。 | ||
注意 | 因為標準品是用Schleicher & Sshcuell No. 903濾紙確定的，所以濾紙的材料會影響實驗結果，我們建議您也使用Sshleicher這種紙片。采血時請勿擠壓穿刺部位，因為擠壓會早成溶血或組織液稀釋血液。不要在采血圈內連續滴血。請勿接觸或涂抹血斑。確保血斑樣品看上去符合實驗要求（例如：血無涂抹，無凝塊，血斑上無指紋）。 | |
注意 | 樣品應當在嬰兒出生后第三天到第五天的時間內采集。（出生后72到120小時內）。出生不到72小時就采集的樣品可能產生假陰性結果。 | |
儲存 | 2-8℃ | 避免熱源和太陽直射 |
穩定性 | 6個月 |
【檢驗方法】
1、實驗準備
（1）酶儲存液的準備
注意 | 配置好的酶儲存液在2-8℃可穩定存放5天。準備實驗實際所需要的酶反應液即可。 |
在每支凍干的酶試劑瓶內加入12ml雙蒸水，蓋好試劑瓶，輕輕混合以使其充分溶解，混合2分鐘，混合時避免起泡。 |
（2）酶溶液的準備
注意 | 如果您使用了好幾支酶儲存液，我們建議您將各管稀釋液混合并確定混合液的濃度.重新配置好的酶儲存液在18-25℃可穩定存放8小時，儲存于2-8℃的環境下也不能延長它的有效期 |
酶溶液的建議配制量： 反應板數1/32/312345酶儲存液（mL）0.81.62.44.87.29.612稀釋液（mL）2.75.38.016243240 | |
按照上述表格用稀釋液稀釋酶儲存液，充分混合2min，混合時避免起泡 |
（3）有色三氯乙酸（3%）的準備
用3%三氯乙酸按1：51的比例稀釋顯色儲存液(如：加2ml濃縮型的染色儲存液到100ml3%的三氯乙酸中。配置好的三氯乙酸在18-25℃的環境下有效期內穩定。 |
（4）血斑的洗提
用打孔器打下標準品、質控品和樣品血斑紙片（直徑5mm），分別放到相應的聚苯乙烯試管中，標上標簽 | |
在每一試管中加入100ul 3%三氯乙酸，確保每一紙片都被溶液浸沒。 | |
振蕩器（300-500rpm，振幅：1.5-3mm）上室溫（18-25℃）溫育30-60分鐘。 |