胰島素瘤的定性診斷主要依靠Whipple三聯征和血漿胰島素水平測定。診斷胰島素瘤首先要確定癥狀是否由低血糖引起。經典的Whipple三聯征至今仍對診斷具有重要意義，即空腹時癥狀發作；空腹或發作時血糖水平< 2.78mmol/L (50mg/dl)；進食或靜脈推注葡萄糖可迅速緩解癥狀。90%以上的患者根據Whipple三聯征可得到正確診斷。
