1．原理總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸。樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進行比色測定。
2．適用范圍GB12392-90本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定。
3.儀器3.1恒溫箱：37±0.5℃3.2可見-紫外分光光度計3.3打碎機
4．試劑本實驗用水均為蒸餾水，試劑純度均為分析純。4.14.5mol/L硫酸：謹慎地加250ml硫酸（比重1.84）于700ml水中，冷卻后用水稀釋至1000ml。4.285%硫酸：謹慎地加900ml硫酸（比重1.84）于100ml水中。4.32%2，4-二硝基苯肼溶液：溶解2g2，4-二硝基苯肼于100ml4.5mol/L硫酸內，過濾。不用時存于冰箱內，每次用前必須過濾。4.42%草酸溶液：溶解20g草酸于700ml水中，稀釋至1000ml。4.51%草酸溶液：稀釋500ml2%草酸溶液到1000ml。4.61%硫脲溶液：溶解5g硫脲于500ml1%草酸溶液中。4.72%硫脲溶液：溶解10g硫脲于500ml1%草酸溶液中。4.81mol/L鹽酸：取100ml鹽酸，加入水中，并稀釋至1200ml。4.9活性炭：將100g活性炭加到750ml1mol/L鹽酸中，回流1~2h，過濾，用水洗數次，至濾液中無鐵離子（Fe3+）為止，然后置于110℃烘箱中烘干。4.10標準（1）抗壞血酸標準溶液（1mg/ml）：溶解100mg純抗壞血酸于100ml1%草酸溶液中。（2）標準曲線繪制加1g活性炭于50ml標準溶液中，搖動1min，過濾。取10ml濾液放入500ml容量瓶中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀釋至刻度。抗壞血酸濃度為20μg/ml。取5，10，20，25，40，50，60ml稀釋液，分別放入7個100ml容量瓶中，用1%硫脲溶液稀釋至刻度，使最后稀釋液中抗壞血酸的濃度分別為1，2，4，5，8，10及12μg/ml。按樣品測定步驟形成脎并比色。以吸光值為縱坐標，以抗壞血酸濃度（μg/ml）為橫坐標繪制標準曲線。
5.操作步驟5.1樣品制備全部實驗過程應避光。5.1.1鮮樣制備：稱100g鮮樣和100g2%草酸溶液，倒入打碎機中打成勻漿，取10-40g勻漿（含1-2mg抗壞血酸）倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀釋至刻度，混勻。5.1.2干樣制備：稱1-4g干樣（含1-2mg抗壞血酸）放入乳缽內，加入1%草酸溶液磨成勻漿，倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀釋至刻度，混勻。5.1.3將上述兩液過濾，濾液備用。不易過濾的樣品可用離心機沉淀后，傾出上清液，過濾，備用。5.2氧化處理：取25ml上述濾液，加入0.5g活性炭，振搖1min，過濾，棄去最初數毫升濾液。取10ml此氧化提取液，加入10ml2%硫脲溶液，混勻。5.3呈色反應5.3.1于三個試管中各加入4ml稀釋液。一個試管作為空白，在其余試管中加入1.0ml2%2，4-二硝基苯肼溶液，將所有試管放入37±0.5℃恒溫箱或水浴中，保溫3h。5.3.23h后取出，除空白管外，將所有試管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室溫，然后加入1.0ml2%2，4-二硝基苯肼溶液，在室溫中放置10~15min后放入冰水內。其余步驟同樣品。5.3.385%硫酸處理：當試管放入冰水后，向每一試管中加入5ml85%硫酸，滴加時間至少需要1min，需邊加邊搖動試管。將試管自冰水中取出，在室溫放置30min后比色。5.3.4比色：用1cm比色杯，以空白液調零點，于500nm波長測吸光值。
6.計算同熒光法。
7.注意事項
7.1大多數植物組織內含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶，因此，抗壞血酸的測定應采用新鮮樣品并盡快用2%草酸溶液制成勻漿以保存維生素C。
7.2若溶液中含有糖，硫酸加得太快，溶解熱會使溶液變黑。
7.3試管自冰水中取出后，顏色會繼續變深，所以，加入硫酸后30分鐘應準時比色。