實驗原理
維生素B2（核黃素）在440~500nm波長光照射下發生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強度與維生素B2的濃度成正比。利用硅鎂吸附劑對維生素B2的吸附作用去除樣品中的干擾熒光測定的雜質，然后洗脫維生素B2,
測定其熒光強度。試液再加入連二亞硫酸鈉（Na2S2O4），將維生素B2還原為無熒光的物質，再測定試液中殘余熒光雜質的熒光強度，兩者之差即為食品中維生素B2所產生的熒光強度。
試劑和器材
一、試劑
0.1 mol/L鹽酸; 1 mol/L氫氧化鈉; 0.1 mol/L氫氧化鈉; 20%(w/v)連二亞硫酸鈉溶液;
洗脫液：丙酮+冰醋酸+水（5+2+9）; 0.04%溴甲酚綠指示劑; 3%（v/v）高錳酸鉀溶液;
3%(v/v)過氧化氫溶液；2.5mol/L無水乙酸鈉溶液；硅鎂吸附劑：60~100目，sigma 公司產品。
10%木瓜蛋白酶：用2.5mol/L乙酸鈉溶液配制。使用時現配制。
10%淀粉酶：用2.5mol/L乙酸鈉溶液配制。使用時現配制。
維生素B2標準液的配制：
A)
維生素B2標準儲備液（25μg/mL）：將標準品維生素B2粉狀結晶置于真空干燥器中。經過24小時后，準確稱取50mg，置于2L容量瓶中，加入
2.4mL冰乙酸和1.5mL水。將容量瓶置于溫水中搖動，待其溶解，冷卻至室溫，稀釋至2L，移至棕色瓶中，加少許甲苯復蓋于溶液表面，于冰箱中保存。
B) 維生素B2標準使用液：吸取2.00mL維生素B2標準儲備液，置于50ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度。避光，貯于4℃冰箱，可保存一周。此溶液每毫升相當于1.00μg維生素B2。
二、材料
新鮮豬肝或干黃豆。
三、器材
試管1.5×20cm（×4）; 移液管10mL（×1）, 1 mL（×2）；容量瓶100mL（×1），10mL（×1）；高壓消毒鍋，電熱恒溫培養箱，維生素B2吸附，熒光分光光度計。
操作方法
一、樣品提取
1．水解：稱取2~10g樣品（約含10~200μg 維生素B2）于100ml三角瓶中，加50mL
0.1mol/L鹽酸，攪拌直到顆粒物分散均勻。用40ml瓷坩堝為蓋扣住瓶口，于121℃高壓水解樣品30min。水解液冷卻后，滴加1mol/L氫氧化鈉，用0.04%溴甲酚綠作外指示劑調至pH為4.5。
2．酶解：含有淀粉的水解液：加入3ml 10%淀粉酶溶液，于37~40℃保溫約16h。含高蛋白的水解液：加3ml10%木瓜蛋白酶溶液，于37~40℃約16h。
3．過濾：上述酶解液定容至100ml，過濾。此提取液在4℃冰箱中可保存一周。
二、氧化去雜質
視樣品中維生素B2的含量取一定體積的樣品提取液及維生素B2標準使用液（約含1~10μg維生素B2）分別于
20ml的帶蓋刻度試管中，加水至15ml。各管加0.5ml冰乙酸，混勻。加3%高錳酸鉀溶液0.5ml，混勻，放置2min，使氧化去雜質。滴加3%
雙氧水溶液數滴，直至高錳酸鉀的顏色褪掉。劇烈振搖此管，使多余的氧氣逸出。
三、維生素B2的吸附和洗脫
1．維生素B2吸附柱：硅鎂吸附劑約1g用濕法裝入柱，占柱長1/2~2/3（約5cm）為宜（吸附柱下端用一團脫脂棉墊上），勿使柱內產生氣泡，調節流速約為60滴/min。
2．過柱與洗脫：將全部氧化后的樣液及標準液通過吸附柱后，用約20ml熱水洗去樣液中的雜質。然后用 5.00ml洗脫液將樣品中維生素B2洗脫并收集于一帶蓋10ml刻度試管中，再用水洗吸附柱，收集洗出之液體并定容至10ml，混勻后待測熒光。
四、測定
1．于激發光波長440nm，發射光波長525nm測量樣品管及標準管的熒光值。
2．待樣品及標準的熒光值測量后，在各管的剩余液（約5~7ml）中加0.1ml20%連二亞硫酸鈉溶液，立即混勻，在20s內測出各管的熒光值，作為各自的空白值。
五、計算
按下式計算樣品中維生素B2的含量：
式中： X —樣品中含維生素B2的量，mg/100g；
A —樣品管熒光值；
B —樣品管空白熒光值；
C —標準管熒光值；
D —標準管空白熒光值；
f —稀釋倍數；
m —樣品的質量，g；
S —標準管中的維生素B2含量，μg；
100/1000 —將樣品中維生素B2量由μg/g折算成mg/100g的折算系數。
注意事項
維生素B2極易被光線破壞，實驗操作應盡可能避光。