給細菌提供適宜的條件,細菌即可以生長繁殖,形成具有一定特征的培養物,學習細菌培養技術可以純化細菌,了解細菌的生長特征,并能進一步檢測細菌生化反應、變異性,制備細菌抗原 ,深入進行分子生物學工作等。了解細菌的培養特征也有助于鑒別細菌。
細菌 培養基的制備
培養基是用人工方法將適合細菌生長繁殖的各種營養物配制而成的營養基質,以供細菌培養使用。一般培養基的主要成份為蛋白質、糖類、鹽類、水分等。另外還有一些營養要求較高的細菌,還必須加入血液或血清、雞蛋、維生素等其他營養物質。有時為了鑒別或抑制某些細菌,則可加入各種專用基質(如某種糖類、氨基酸等),指示劑,染料等。由于對培養基的使用目的不同,故在培養基的選擇上有所不同。按其物理性質可分為液體培養基、固體培養基、半固體培養基。按其成分和用途可分為普通培養基,鑒別培養基,選擇培養基和專用培養基等。培養基需加入小試管、中試管、三角瓶、平皿等內使用。
培養基的種類很多,但一般制備原則有三條:
足夠和適當的營養成份。籍以滿足細菌生長繁殖的要求,獲得典型細菌培養物,達到研究細菌的形態,生化反應,抗原結構及致病力等方面的目的。
2. 合適的酸鹼度。培養基的酸鹼度直接影響細菌的生長繁殖。一般細菌最合適PH為7.2~7.6。測定的方法常用普通比色法或精密PH試紙來測定。
3. 絕對無菌。培養基務必進行除菌處理,由于培養基所含成份不同,除菌的方法也不同。如普通培養基常用高壓蒸氣滅菌法。
一、常用培養基的制備
(一)普通肉湯培養基
【材料】
新鮮牛肉或牛肉膏,蛋白胨,氯化鈉,瓊脂,蒸餾水。
2. 酚紅指標劑,比色架及標準比色管或精密PH試紙。
3. 漏斗,量筒,三角燒瓶,試管等。
【方法】
稱取去脂去腱絞碎的鮮牛肉500克,浸于1000毫升蒸餾水中,冰箱過夜,次日煮沸30分鐘,紗布過濾,蒸餾水補足其量,(也可用牛肉膏3克加蒸餾水1000毫升加熱溶化),即為肉浸液。
2. 取肉浸液1000毫,氯化鈉5克,蛋白胨10克混合加熱溶化。
3. 調整PH為7.6,用濾紙過濾分裝于中試管或三角燒瓶內,塞緊棉塞。
【用途】
供基礎培養基用,營養比肉膏湯好,一般營養要求不高的菌均可生長。
(二)普通瓊脂培養基
瓊脂是石花菜等海藻類提取的膠體物質,其化學成份主要是多糖。當溫度達到98℃以上可溶解于水,45℃以下則凝固。瓊脂對細菌一般無營養作用(除自然界中極少數菌可利用瓊脂之外),純屬賦形劑。便于人們制做斜面、平板、高層等不同類型的固體培養基。
【材料與方法】
普通肉湯培養基100毫升,加入瓊脂2~3克,加熱溶化,用蒸餾水補足失去水分,調整PH為7.6后分裝中試管、平皿等器皿,高壓蒸氣15磅滅菌20分鐘,可制成普通瓊脂斜面和普通瓊脂平板。
【用途】
供一般細菌培養用,并可作無糖基培養基。
(三)半固體培養基
【材料與方法】
取普通肉湯培養基100毫升,加入瓊脂0.5~0.7克,加熱溶化。調整PH為7.6,分裝于小試管內,每管1~5毫升,高壓蒸氣磅滅菌20分鐘,待冷后放入4℃冰箱備用。
【用途】
保存一般菌種用,并可觀察細菌的動力及生化反應。
(四)血液瓊脂培養基
【材料與方法】
將高壓滅菌后普通瓊脂培養基。冷至45℃~50℃時以無菌手續操作加入5%~10%血液(人或動物脫纖維無菌血液)。可制成血平板和血斜面。
【用途】
供營養要求較高的細菌分離培養用,亦可觀察細菌的溶血特征。
二、細菌接種技術及生長表現
由于細菌感染而致病的各種標本及帶菌者所需檢查的各種標本,往往并非單一的細菌,而混有其它非致病菌(人體正常菌群)。因此當對此標本須作出細菌鑒定時,就必須從標本中分離出致病菌,稱為細菌分離培養技術。另外,對已得到可疑病菌進行細菌鑒定及菌種保存等培養,稱為純培養接種技術。
(一)平板劃線接種法(又稱分離培養法)
平板分離劃線的方法較多,其中以分區劃線法與曲線劃線法較為常用。其目的都要使細菌呈現單個菌落生長,便于同雜菌菌落鑒別。現只介紹分區劃線法。