細胞該怎么凍存，一篇文章告訴你

 人小梁細胞主要功能：
   （1） 人小梁網細胞分離自人眼的近小管組織和角鞏膜區域。
   （2） 小梁網細胞在房水流動機制中發揮重要作用。
   （3） 在小梁網細胞中有特定的神經遞質和神經肽受體，其中包括腎上腺素，乙酰膽堿和神經肽Y。
（4） 小梁網細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬蛋白酶。

   材料準備：
   1.  儀器：凈化工作臺、 離心機、恒溫水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差顯微鏡、培養箱、液氮冰箱。
   2.  玻璃器皿：吸管（彎頭、直頭）、 培養瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、廢液缸。
   3.  塑料器皿： 吸頭、槍頭、膠塞、移液管（10ml）、15ml離心管、凍存管（1～2ml）。
   4.  其他物品：微量加樣槍、紅血球計數板、記號筆、醫用橡皮膏、移液槍。
   5.  試劑：D-Hanks液、胎牛血清、培養液、雙抗（青霉素、鏈霉素）、胰蛋白酶（0.08%）、1NHCl、7.4%NaHCO3、DMSO（分析純）或無色新鮮甘油。

   細胞凍存：
   1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細胞凍存。
   2、取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中。
   3、離心1000 rpm,5 min。
   4、去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml。
   5、 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者。
   6、凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；當溫度達到-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

    細胞復蘇：
   1.  從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
   2.  從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養液，混勻。
   3.  離心， 1000 rpm，5 min。
   4.  棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養。
   5.  次日更換一次培養液，繼續培養。