細胞又雙叒叕污染了，怎么解決？

在細胞培養過程中，廣大科研工作者一直飽受微生物污染的困擾，幾乎所有科研單位的細胞房都曾經遭受過細菌、真菌、支原體、黑膠蟲的污染，尤其是一些珍貴的細胞種子，一 旦招惹上這幾個家伙，甚至面臨“絕種”的危險。針對細胞培養當中面臨的蕞普遍的問題，作為科研工作者的我們必須清楚認識這些微生物，并通過技術手段判斷細胞遭受了哪種污染， 準確的對癥下藥，才能為我們的細胞保駕護航。

1 細菌污染

1.1 細菌污染的鑒別

細菌污染是細胞培養當中最常出現的污染類型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養瓶口處穿過、培養基倒入培養瓶等等，不經意的一個小動作，都可能會造成細菌污染，以致于實驗前功盡棄。 細菌污染在沒有爆發或培養體系中含有雙抗時，細菌污染較容易被科研工作者忽視，黑點在顯微鏡下一穿而過，小黑點因為數量少且移動迅速而不易發現。隨著細菌在培養體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后，細菌可以從鏡下明顯識別，會呈現黑色條狀、棒狀、球狀， 培養基的外觀也會發生明顯的變化，培養基變渾濁，有細沙狀沉淀，有時會伴有臭味。

1.2 細菌污染的解決方式

一般的細胞培養體系中，普遍采用雙抗或者三抗進行細菌的預防，但這兩者存在一定的局限性，比如只能預防，而不能拯救已經細菌污染的細胞。另外，很多科研工作者從事原代的細胞分離和培養工作，在從動物身上取材并分離培養的過程中，極易造成細菌污染，如果只是加入雙抗或三抗進行沖洗組織，細菌污染無法避免，造成了珍貴動物組織的浪費。

使用細胞污染高效清除劑

iCell 細胞污染高效清除劑，不僅兼具雙抗或三抗預防細菌的功效，還可以清除支原體污染，有效消除真菌和細菌的污染，只需 1-3 天就可顯著抑制支原體、真菌、細菌的增殖， 本產品經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，wan美兼具高效和廣譜清除細胞污染物的能力，對細胞生長幾乎無影響，大程度上挽救您的細胞。

2.真菌污染

2.1 真菌污染的鑒別

實驗室污染的真菌一般為三類：念珠菌、酵母菌、霉菌，細胞污染真菌通常不易察覺，只有霉菌會逐漸出現細絲團狀漂浮物，較容易從外觀發覺污染，其他真菌污染不像細菌污染培養基會渾濁，污染后培養液清澈透亮，與未污染的細胞從外觀上看無明顯變化。

在顯微鏡下比較容易判斷污染類型，念珠菌呈卵圓狀，在細胞周邊生長，酵母菌出芽生殖時有明顯的一大一小連體結構，霉菌可觀察到菌體，菌絲呈絲狀、管狀、樹枝狀。

2.2 真菌污染的解決方式

真菌污染由于不容易通過培養基的變化來判斷，一般發現時就是已經爆發了，鏡下會出現明顯團狀或黑色絲狀污染物，細胞狀態明顯變差，很難救活。傳統的預防真菌污染的方式為培養體系中加入三抗，但是一旦發生真菌污染，三抗對于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足，此時建議如果是還留存種子的細胞就立刻扔掉，徹底消毒滅菌細胞房和 CO2 培養箱，扔掉可能被污染的培養基，對用過的實驗器材進行滅菌。

使用真菌清除劑

真菌清除劑用于防止細胞培養過程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細胞培養物中的真菌（含酵母）污染。療效遠超真菌抗生素兩性霉素 B，對細胞培養過程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。

真菌清除試劑經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，只需 1-3 天就可以抑制真菌增長。對細胞基本無害，具有高效、特異性殺滅的特點，大程度上挽救珍貴的細胞，減少真菌污染帶來的損失。

3 黑膠蟲污染

3.1 黑膠蟲污染的鑒別

“黑膠蟲”是一種常見的細胞污染物，與細胞共生，隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，對細胞生長不利，嚴重時導致細胞死亡。目前很多細胞存在被“黑膠蟲”污染的現象，對細胞培養及其后續實驗造成了極大地影響。

“黑膠蟲”污染的細胞常見的特性有以下幾點：

（1）培養基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細胞時，細胞周圍和培養液中有很多“小黑點”， 且隨著培養時間的延長“小黑點”逐漸增多，更換培養液或洗滌細胞不能將其去除；

（2）“黑膠蟲”污染的細胞，營養消耗快，需要頻繁更換培養液；

（3）“黑膠蟲”污染的細胞生長緩慢，細胞狀態差，空泡化嚴重，甚至還可能導致細胞形態的改變。

3.2 黑膠蟲污染的解決方式

對于黑膠蟲污染的細胞，最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲清除劑對黑膠蟲進行清除，同時確保培養體系中的血清必須為無黑膠蟲和原蟲污染的優質血清。

使用黑膠蟲清除劑

黑膠蟲清除試劑用于清除細胞培養過程中產生的“黑點”，只需 1-3 天就可以顯著抑制“黑點”生長，一周左右即可清除“黑點”。

本產品經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，對細胞生長無明顯影響，具有高效、特異性殺滅的特點，可顯著清除黑膠蟲污染，大程度上挽救珍貴的細胞。

4 支原體污染

4.1 支原體污染的鑒別

支原體直徑約為 0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。

支原體污染是細胞培養領域的一個世界性問題，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為 30-60%。支原體可通過細胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學顯微鏡下不可見，一般不會引起培養物混濁，因此細胞被支原體污染一般難以察覺。

支原體會消耗必須氨基酸，影響細胞生長速率，促進代謝物積累，改變細胞形態，影響 DNA、RNA 以及蛋白質的合成，抑制細胞因子表達，改變被污染細胞的基因表達譜，誘導染色體畸變。