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    發布時間:2021-04-28 15:30 原文鏈接: 糖尿病及其并發癥的實驗室檢測及方法學評價(一)

    (一)體液葡萄糖的檢測

        酶法為推薦使用的測定方法(如:己糖激酶法或葡萄糖氧化酶法)。

        1. 標本收集和貯存   

        大多數臨床實驗室采用血漿或血清測葡萄糖濃度,而大多數床旁測定葡萄糖的方法使用的是全血。使用不同的標本應采用不同的參考值。

        室溫下,血細胞中進行的糖酵解使血中葡萄糖減少,在獲得標本后應盡快測定。

        通過向標本中加碘乙酸鈉或氟化鈉可抑制糖酵解作用,使血葡萄糖在室溫下穩定3天。

        2. 已糖激酶法   

        (1)原理:在有已糖激酶(hexokinase)和Mg2+存在下,葡萄糖被ATP磷酸化為6-磷酸葡萄糖。在NADP+參與下,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶將6-磷酸葡萄糖氧化為6-磷酸葡萄糖酸,同時NADP+轉變為NADPH+H+。NADPH生成量與標本中葡萄糖含量成正比,可以在340 nm波長監測NADPH吸光度變化,定量葡萄糖。用從酵母中獲得的G-6-PD,需NADP+作為輔因子。如使用細菌來源的G-6-PD,則以NAD+作為輔因子,NADH的生成量也在340nm測定。

        (2)評價:該法準確度和精密度高,特異性高于葡萄糖氧化酶法,適用于自動化分析,為葡萄糖測定的參考方法。輕度溶血、脂血、黃疸、氟化鈉、肝素、EDTA和草酸鹽等不干擾本法測定。

        3. 葡萄糖氧化酶法

        (1)原理:葡萄糖氧化酶(glucose oxidase, GOD)催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫(H2O2),再加入過氧化物酶和色原性氧受體(如聯大茴香胺,4-氨基安替比林偶聯酚),生成有色化合物,比色定量。

        (2)評價:GOD高特異性催化β-D-葡萄糖。而葡萄糖α和β構型各占36%和64%。要使葡萄糖完全反應,必須使α-葡萄糖變旋為β-構型。某些商品試劑中含有變旋酶,可加速變旋過程。也可延長孵育時間,通過自發性變旋來轉化。過氧化物酶的特異性遠低于GOD。尿酸、維生素C、膽紅素、血紅蛋白,四環素和谷胱甘肽等可抑制呈色反應(通過與H2O2競爭色素原受體),用Somogyi過濾可以除去大部分干擾物質。

        4. 尿葡萄糖測定   

        尿糖檢測快速、廉價和無創傷性,適用于大規模樣本的篩選。

    (二)酮體的檢測

        酮體(ketone  bodies)由乙酰乙酸、β-羥丁酸和丙酮組成。最主要的來源為游離脂肪酸在肝臟的氧化代謝產物。

        由于尿酮體檢測的方便性,已廣泛用于1型糖尿病的病情監測。

        尿酮體測定:Acetest和Ketostix法都適于對尿酮體的測定。其特異性和靈敏度與測定血清時相同。

     


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