將特異的熒光抗體先固體于硝酸纖維素膜的某一區帶，當該干燥的硝酸纖維素一端滴加樣品后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區域時，樣品中相應的抗原即與該熒光體發生特異性結合，隨著進一步的層析作用，用此抗原的另一個抗體對此復合物進行捕捉，多余的熒光抗體用其二抗進行捕捉，兩次捕捉的位置分別稱為質控線（C線）和檢測線（T線）。當光源照射到檢測卡上時，質控線和檢測線分別激發出不同強度的熒光，光電轉換器接收不同強度的熒光產生不同大小的電信號，電信號的強弱反映出待檢測物的濃度，從而實現特異性的免疫診斷。