云南各地收集到20份紫蘇品種并進行了多年的栽培和經濟性狀評估,發現在紫蘇種內存在 著豐富的遺傳變異,并且已用形態聚類分析的方法對云南境內紫蘇的種下變異進行了探討,將其分為5個變種。由于形態特征是基因型和環境相互作用的產物,紫蘇 的形態聚類分析結果僅從表現型上間接地反映出了云南境內紫蘇的遺傳多樣性。試驗以云南紫蘇種子為材料,研究了紫蘇基因組DNA的提取和RAPD引物篩選, 為從DNA多態性角度直接揭示云南紫蘇的遺傳多樣性奠定了基礎。種子DNA提取儀是對種子DNA進行提取的重要儀器。
種子DNA提取儀在 該研究中發揮了重要的作用，紫蘇種子DNA的提取參照改進的提取煙草DNA的CTAB法,略有改動,試劑均為國產分析純。取0.1～0.2g種子,置于經 -20℃冰箱降過溫的研缽中磨碎,轉入1.5mL的離心管中,加入0.35mL的55℃預熱過的1×DNA提取液(50mmol/LTris- HClpH7.5,10mmol/LEDTApH8.0,0.7mmol/LNaCl,1%β-巰基乙醇,1%CTAB),3min后加入2×DNA提取液(濃度為前者的兩倍),放入55℃培養箱中過夜,其間顛倒數次,加入0.7mL飽和酚,在自制的混勻器(2r/min)上混勻抽提3h,6000r /min下離心10min,將上清液轉入至另一管中,加入0.35mL飽和酚和0.35mL氯仿-異戊醇(24∶1)抽提2h,6000r/min下離心10min,取上清液至另一管中,加入0.7mL氯仿-異戊醇(24∶1)抽提2h,6000r/min下離心10min,取上清液至另一管中,加入 0.07mL3mol/LNaAc和0.7mL異丙醇,室溫下沉淀30min,3000r/min下離心5min,棄上清液,用70%酒精洗滌DNA,晾 干后加入100μLTE溶解。
在植物分子標記研究中,種子DNA提取儀提取基因組DNA一般都以新鮮的幼嫩葉片作材料,極少見到用成熟種子作材料提取基因組DNA的報道。由于紫蘇葉片含有豐富的紫蘇色素和酚類物質,不經特殊處理很難獲得高質量的基因組DNA,于是我們嘗試用紫蘇種子作材料,用改良的CTAB法來提取紫蘇的基因組DNA。