石蠟切片的制作

以石蠟制作的切片，可以制成極薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蠟切片不但可以達到這個要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。這一點是冰凍切片和火棉膠切片難以獲得的結果。另外，石蠟切片還便于制作大批的或是連續的切片。而且以石蠟包埋的組織塊便于長期保存。所以石蠟切片是目前各種切片制作方法中最普通常用的一種方法。

一、切片前的準備： 

1、恒溫水浴 鍋首先預熱至35℃—40℃。

2、蠟塊整修，將蠟塊組織面的石蠟用刀修去，使組織全部暴露出切面并修平，以減少切片刀的磨損。將組織塊左右兩側的石蠟在不損傷組織及影響診斷的原則上，全部切除；否則切片容易皺褶。組織塊上下邊緣的石蠟視組織情況修齊修平；石蠟不須留得過多，應盡量少留，以保持組織間距的最小限度。這樣切下的切片既呈帶狀，也不彎曲。片距小，在貼片時就可相應多貼片，有利于檢查診斷。修切蠟塊時只能一點一點地切掉蠟邊，要是大片修切易使蠟塊斷裂露出組織；遇此情況應返入新蠟再次包埋。

3．載玻片應事先洗滌干凈，無油膩和不透明現象，應將載玻片浸入酸缸內12小時后流水沖洗，再烤干備用。根據切片需要張數，每片涂上一層極薄的蛋白甘油，插于載片板（或載片架）上備用。

蛋白甘油的配制：取新鮮雞蛋1份加甘油1份再加適量麝香草酚攪勻。此法主要是防止脫片，實際上一張很清潔的載玻片不涂蛋白甘油也不會脫片。

4、將鋒利的刀片裝入切片刀夾鉗內，調整角度和位置后隨即緊固，檢查切片刀的傾斜度是否正確，傾角過大、則切片上卷；傾角過小則切片皺起，以20°-30°為佳。

5、備用小型毛筆、小型無鉤鑷子、鉛筆。

二、切片的步驟：

1、將蠟塊固定于切片機頭上的夾座內，調整到稍離開切片能夠切到的位置上，注意蠟塊組織切面與切片刀口要垂直平行。

2、再調整蠟塊組織切面恰好與刀口接觸，旋緊刀架，固定好機頭。

3、根據需要調整切片厚度。

4、搖動切片機手輪先進行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，再進行切制。

5、實踐中可用右手轉動切片機手輪，左手用毛筆托起蠟片，協調地進行切片操作。

6、切下的切片帶，一端用鑷子輕輕拉起，應盡可能將切片帶拉直展開，用毛筆將切片帶從刀口向上挑起，拉下切片帶，然后輕拖鋪于恒溫水面上。

三、切片的注意事項 

1、切片質量的好壞，除與技術熟練程度和切片機的好壞有關外，切片刀是決定的因素，所以刀一定要磨得十分鋒利。否則在切片時會自行卷起或皺起，或將組織劃傷出現刀痕，更不能順利地將切片切成連續地長條帶狀。切片刀如有缺口存在，將使制成的切片斷裂、破碎，不完整，切片時應時時擦凈刀口。

2、切片機的各個零件和螺絲應旋緊，否則將會產生震動。在每次更換蠟塊時，應習慣地檢查一下組織塊是否夾緊，切片刀是否穩固，稍有疏忽就會影響切片質量，甚至將蠟塊全部切壞，造成不可彌補的后果。在切制切片的開頭階段如出現切制不良與其他故障，最常見的原因是蠟塊或切片刀的松動所致。

3、在搖動切片機時，用力要求均勻一致，不宜過重過猛，否則可因用力過重而使機身震動，造成切片厚薄不均。遇有硬化過度的腦、肝、脾等組織時，更應該輕輕切削，以防組織由于震動形成空洞現象。

4、在夏秋季節進行切片時，應使用冰塊加強冷卻，這樣不僅可保持石蠟的硬度，同時也減少了切片的褶皺，給切片制作帶來方便。

四、貼片 ：

1、將單張或數張切片，用鑷子夾住蠟片的一邊并提起，鋪于恒溫水中，（光亮的一面朝下）立即用毛筆輕輕拉展以切片無皺褶為最好。如有皺褶時用鑷子細心地逐個輕輕撥開，注意不可撥破組織。然后分開每張切片，選取其中最完整的，沒有皺褶的切片。

2、待切片在恒溫水內充分攤開展平后，將載玻片垂直插入水中以涂有蛋白甘油面輕靠切片，并用毛筆將切片一邊撥于玻片上，隨即將玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份時用毛筆，撥正切片位置。如組織較小，可在玻片上多貼幾片或幾排，但排列應密集、整齊。

3、用鉛筆在玻片一端的毛玻璃上寫上標本編號，字要寫得小而清楚、端正。

4、將附貼好的切片置于60℃恒溫箱 內干燥2小時，蛋白質凝固后即可進行染色。