石蠟切片免疫組化步驟

實驗概要

石蠟切片免疫組織化學染色

主要試劑

染色缸；染色架；保濕盒；晾片盤；微量移液器；0.2MPBS，乙醇，二甲苯，BSA，中性樹膠等

實驗步驟

1.     石蠟切片放置在60℃恒溫箱中烘烤120分鐘；

2.     脫蠟和水化：二甲苯(10min)→二甲苯(10min)→無水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→90%(5min)→85%乙醇(5min) →80%乙醇(5min) →75%乙醇(5min)；

3.     蒸餾水沖洗2次5min；

4.     加3%H₂O₂孵育30min(室溫)；

5.     蒸餾水洗2次；

6.     抗原修復：高壓修復或微波修復

檸檬酸修復液：檸檬酸0.4g 檸檬酸鈉3g配成1000ml

高壓修復：高壓2min；微波修復：預熱5min，高火4min，中火5min；

7.     PBS洗3次各5min，封閉30min；

8.     滴加一抗，4℃過夜或37℃孵育2~3h；

9.     PBS沖洗3次各5min；

10.  滴加二抗，37℃孵育30~60min；

11.  PBS洗3次各5min；

12.  DAB顯色，自來水充分沖洗；

13.  蘇木素復染，自來水充分沖洗；

14.  脫水、透明各5~10min；

15.  封片：中性樹脂，加蓋玻片(組織部位切勿殘留小氣泡)，自然晾干。