一、組織和細胞標本類型:
(一) 組織標本類:
1、 石蠟切片:組織形態保存好
2、 冰凍切片:抗原性保存好
(二)細胞標本類:
1、組織印片 2、細胞培養片(細胞爬片) 3、細胞涂片
二、組織取材
1、腦組織和神經組織應采用灌注固定后,再進行后固定。
2、組織取材注意事項:
(1)標本新鮮:組織要求離體后30min~2h內浸入固定液,尤其是開展分子生物學工作。動物組織取材要求心臟還在跳動時取材。
(2)注意防止人為因素的影響 刀和剪要快,避免擠壓。
(3)組織塊的大小 厚為0.1~0.3cm,大小可根據需要而定。
三、活細胞標本的制備法
(1)細胞大量培養后,經消化將細胞制成懸液(106)涂在涂有切片粘合劑的載玻片上,涼干后固定。
(2)將細胞直接培養在蓋玻片上。
(3)將細胞直接培養在6孔或9孔板上,經固定后可行IHC。
四、石蠟切片的制備
1、由于石蠟不溶于水和醇類試劑,只溶解在二甲苯類試劑中。因而,組織經固定和水洗后含大量水分,需用乙醇類試劑進行脫水,水脫完后,組織內含有大量的乙醇,還必須用能溶解乙醇的二甲苯來置換,最后經浸蠟,組織細胞內被大量石蠟支稱,才使組織能用于石蠟切片。
2、小動物組織脫水、透明和浸蠟時間
75%乙醇30min,85%乙醇30min,95%乙醇Ⅰ1h,Ⅱ1h,Ⅲ過夜或2h;無水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min;二甲苯Ⅰ15min, Ⅱ10min,Ⅲ10min;石蠟Ⅰ30min,石蠟Ⅱ30min,石蠟Ⅲ1~2h。
五、冰凍切片的保存和使用
1、冰凍切片固定后-80℃保存備用
2 、冰凍切片從-80℃取出,涼干或電吹風吹干后可直接進行免疫組化標記。