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    發布時間:2020-09-14 15:29 原文鏈接: 石蠟切片與冰凍切片

    一、組織和細胞標本類型:

    (一) 組織標本類:

    1、 石蠟切片:組織形態保存好

    2、 冰凍切片:抗原性保存好

    (二)細胞標本類:

    1、組織印片 2、細胞培養片(細胞爬片) 3、細胞涂片

    二、組織取材

    1、腦組織和神經組織應采用灌注固定后,再進行后固定。

    2、組織取材注意事項:

    (1)標本新鮮:組織要求離體后30min~2h內浸入固定液,尤其是開展分子生物學工作。動物組織取材要求心臟還在跳動時取材。

    (2)注意防止人為因素的影響 刀和剪要快,避免擠壓。

    (3)組織塊的大小 厚為0.1~0.3cm,大小可根據需要而定。

    三、活細胞標本的制備法

    (1)細胞大量培養后,經消化將細胞制成懸液(106)涂在涂有切片粘合劑的載玻片上,涼干后固定。

    (2)將細胞直接培養在蓋玻片上。

    (3)將細胞直接培養在6孔或9孔板上,經固定后可行IHC。

    四、石蠟切片的制備

    1、由于石蠟不溶于水和醇類試劑,只溶解在二甲苯類試劑中。因而,組織經固定和水洗后含大量水分,需用乙醇類試劑進行脫水,水脫完后,組織內含有大量的乙醇,還必須用能溶解乙醇的二甲苯來置換,最后經浸蠟,組織細胞內被大量石蠟支稱,才使組織能用于石蠟切片。

    2、小動物組織脫水、透明和浸蠟時間

    75%乙醇30min,85%乙醇30min,95%乙醇Ⅰ1h,Ⅱ1h,Ⅲ過夜或2h;無水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min;二甲苯Ⅰ15min, Ⅱ10min,Ⅲ10min;石蠟Ⅰ30min,石蠟Ⅱ30min,石蠟Ⅲ1~2h。

    五、冰凍切片的保存和使用

    1、冰凍切片固定后-80℃保存備用

    2 、冰凍切片從-80℃取出,涼干或電吹風吹干后可直接進行免疫組化標記。

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