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    發布時間:2021-12-06 18:41 原文鏈接: 真菌培養的詳細介紹

      真菌培養

      真菌培養是臨床上病原性真菌常用的非常重要的檢查方法。

      適用條件:

      確定臨床標本中病原真菌的種類,提高對病原體檢出的陽性率,保存菌種,確定病原真菌的藥物敏感性、篩選耐藥菌株;一旦發現肯定的致病原,譬如紅色毛癬菌或新生隱球菌時,即可確立診斷。

      所用培養基的種類和意義:

      1、基礎分離培養基:只提供病原性真菌生長所需要的最基本成分譬如碳、氮、磷以及礦物質的培養基。

      2、沙堡弱氏培養基(SDA):由Sabouraud于18世紀開發,起初用粗制蛋白胨作氮源,以麥芽糖或蜂蜜為碳源。大多數真菌生長尚可,隨后用精制蛋白胨和葡萄糖代替原有成分。Emmons改良后使其碳水化合物為2%,pH升至6.8-7.0,加入放線菌酮和氯霉素以抑制腐生型真菌(多數可能為條件致病菌)和大多數細菌(并非所有細菌)。含這兩種抗生素的SDA(pH6.8-7.0)已有商品供應。放線菌酮也抑制新生隱球菌、一些念珠菌、煙曲霉等,應該引起注意。含4%糖、低pH的SDA仍用于皮膚癬菌的形態學研究。

      3、腦心浸膏瓊脂(BHI):BHI也用于雙相真菌皮炎芽生菌等從菌絲相向酵母相轉變時,其中也可以加入抗生素和血液制品。

      4、抑制性霉菌瓊脂(IMA):氯霉素可抑制細菌的生長而不抑制真菌的生長,IMA用于臨床標本最初的增菌培養,常用于篩選防線菌酮敏感的真菌,如隱球菌、組織胞漿菌和接合菌。

      5、特殊培養基:包括(1)、咖啡酸瓊脂(CAA),用于辨認新生隱球菌,因為新生隱球菌含有酚氧化酶,在CAA培養基中產生黑色素,使菌落呈黑色;此培養基有助于混合培養物中選擇性地培養新生隱球菌;CAA培養基對光敏感,應加以避光保護。(2)、鳥食瓊脂(BA),分離痰等污染嚴重的標本中新生隱球菌。(3)、KT培養基,含吐溫、蛋白、煙酸和0.3%水解酪蛋白氨基酸,用于皮炎芽生菌轉相(為酵母相)培養時使用。(4)、CHROMagar念珠菌顯色培養基,將培養后的單菌落在CHROMagar念珠菌顯色培養基劃線接種,30-37°C培養48小時,觀察顏色變化,根據不同顏色鑒定菌種。

      真菌培養標本的要求:

      在Ⅱ級生物安全柜中進行培養操作。血液標本應該注意合適的量,并多次培養,最好使用解離離心系統處理標本;腦脊液培養陽性可確診,但陽性率低;懷疑呼吸系統真菌感染時,使用深咳出的痰,必要時可進行纖維支氣管鏡防污染毛刷取痰、支氣管肺泡灌洗液、胸腔積液、活檢組織;懷疑泌尿系統感染時,采集清晨清潔的中段尿,最好采集自留置導尿管,盡快接種;皮膚、甲和毛發應收集到折好的黑紙中,盡快接種。

      培養條件:

      建議使用室溫或30°C培養7天,在這種溫度下幾乎所有病原性真菌生長較快較好。在某些情況下,做高溫輔助培養有助于鑒定,譬如煙曲霉在45°C培養時可用來區別其它曲霉。雙相真菌在37°C或組織中可以以酵母或小球體形式生長,常用于區別其它真菌。對于組織、腦脊液等標本,或懷疑罕見真菌或慢生長真菌(如莢膜組織胞漿菌、隱球菌)感染時,建議至少培養1個月;培養箱應有濕度控制。

      真菌培養結果的意義:

      無菌部位(譬如血液、腦脊液)的標本,真菌培養陽性,即可確定診斷。非無菌標本,兩個試管有單一形態真菌生長,真菌鏡檢同時陽性者提示有臨床意義;應當結合真菌生長部位、是否連續培養陽性、真菌鏡檢提示、組織病理學結果、最高生長溫度及患者的臨床信息,以區分致病菌和污染菌

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