
質粒 DNA 和其他包裝質粒共轉染細胞(293T 細胞)產生病毒,即為病毒包裝。
293T 細胞是由 293 細胞派生, 表達 SV40 大 T 抗原的人腎上皮細胞系, 被廣泛應用于瞬時轉染以過表達各種目標蛋白, 或是用以包裝病毒。
病毒包裝的原理(以慢病毒包裝為例)
質粒 DNA 為能轉錄出慢病毒遺傳物質(RNA),但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成
分的載體質粒,其同時連有目的基因和報告基因,psPAX2 為能表達慢病毒外殼的質粒,其
表達產物可通過粘附機制更易穿過細胞膜, pMD2.G 為慢病毒的膜蛋白質粒,通過
lipofectamine2000 進行三質粒共轉到靶細胞基因組中,宿主基因組在表達時,隨宿主基
因轉錄出的目的基因 RNA 與 psPAX2、pMD2.G 基因翻譯出的蛋白組裝為慢病毒。
病毒進入細胞后,其遺傳物質 RNA 反轉錄出 DNA,該基因再整合到靶細胞的基因組中,完成轉染
過程,因為質粒 DNA 只能轉錄出病毒 RNA 和表達目的基因卻不能表達出病毒的外殼和膜
蛋白成分,因此其不能像普通的病毒一樣在宿主細胞能反復增殖,故對宿主細胞是無害的并
且高效的將目的基因轉然到靶細胞基因組中。