電鏡樣品取材方法
1 動物及人體組織的取材
動物組織的取材，應在麻醉（1%戊巴比妥鈉按5ml/kg體重腹腔注射）或斷頭急性處死，解剖出所需器官，用解剖剪刀剪取一小塊組織，放在干凈的紙板上，滴一滴冷卻的固定液，用新的、無油污鋒利的（雙面）刀片將材料切成大約1㎜寬，2～3㎜長的小塊，從中挑選損傷小的小條，再將其切成１㎜3的小塊，最后用牙簽將這些小塊逐一放入盛有冷的新鮮固定液的有蓋青霉素小瓶里，放入冰箱冷藏室低溫固定（0～4℃）。
2 體外培養細胞的取材
生長在培養瓶中的體外培養細胞取材時，先倒出培養液，接著到入適量的戊二醛固定液，在冰浴上放置3～5min，然后用刮刀輕輕刮下瓶壁上的細胞，將含有細胞的固定液轉移到離心管中，普通離心機低速離心（2000轉/分鐘）15min，使細胞聚成團塊，棄去上清夜，換上新鮮固定液繼續固定。
3 植物組織的取材
植物組織的取材比較容易，它的細胞離體后變化不象動物細胞那樣迅速，但植物細胞的細胞壁阻礙著固定液的迅速滲透。因此，植物材料的取材宜切成薄片狀，經適當固定后再切成小方塊。
電鏡樣品取材的基本要求
⑴ 快 取材的動作要迅速，最好在材料離體后１min內就進入固定液；解剖器械要鋒利，避免牽拉和擠壓，盡量減少取材中的機械損傷。
⑵ 準 取材要準確。① 器官要準確 ② 部位要準確：如腦垂體的前葉和后葉要分清，其結構和功能各不相同。
⑶ 冷 取材過程應盡量在低溫下進行（0～4℃），以降低酶的活性，減少細胞內結構的損失。
⑷ 小 所取材料體積要小，一般不超過1㎜3。因為固定劑的滲透力較弱，若組織塊太大，塊的內部將得不到良好的固定。
電鏡制樣中常用固定劑的配制方法
⑴ 緩沖液的配制
Ａ、磷酸緩沖液（0.2M）的配制方法如下：
甲液：Na2HPO4.12H2O 71.64g
加蒸餾水溶解成 1000ml
乙液：NaH2PO4.2H2O 31.21g
加蒸餾水溶解成 1000ml
按下表混合甲、乙兩液即得所需PH的磷酸緩沖液
表1：0.2M的磷酸緩沖液的配制（50ml）
PH 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4
甲液（ml） 13.3 18.8 24.5 30.5 36.0 40.5
乙液（ml） 36.7 31.2 25.5 19.5 14.0 9.5
磷酸鹽緩沖液對細胞無毒性作用，常用于配制戊二醛固定液，并適于作灌注固定。本緩沖液的缺點是固定時容易產生沉淀，并容易生長細菌，不能長期儲存。
B、 二甲胂酸鹽緩沖液（0.2M）
甲液：二甲胂酸鈉 4.28g
加蒸餾水至 100ml
乙液：0.2N鹽酸
按表2混合甲、乙兩液后，將總體積稀釋成200ml即可獲得不同PH的緩沖液
表2：二甲胂酸鈉緩沖液的配制
PH 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4
甲液（ml） 50 50 50 50 50 50
乙液（ml） 18.3 13.3 9.3 6.3 4.2 2.7
本緩沖液比較穩定，不易生長細菌，可長期保存，與低濃度的鈣質（1-3mM）不發生沉淀反應。缺點是胂有毒性、有臭味，配制時應在通風櫥中進行。
⑵ 常用固定液的配制
A、0.1M磷酸緩沖戊二醛固定液（市售戊二醛多為25%的水溶液）
表3：0.1M磷酸緩沖戊二醛的配制
戊二醛最終濃度（%） 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 5.0
0.2M磷酸緩沖液（ml） 50 50 50 50 50 50 50
25%戊二醛水溶液（ml） 4 6 8 10 12 16 20
雙蒸水加至（ml） 100 100 100 100 100 100 100
B、0.1M二甲胂酸鈉緩沖戊二醛固定液
表4：0.1M二甲胂酸鈉緩沖戊二醛固定液的配制
戊二醛最終濃度（%） 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
0.2M二甲胂酸鈉緩沖液（ml） 50 50 50 50 50
25%戊二醛水溶液（ml） 4 6 8 10 12
雙蒸水加至（ml） 100 100 100 100 100
C、多聚甲醛-戊二醛固定液
取2克多聚甲醛粉末溶于25毫升蒸餾水，65℃下不斷攪拌，加1-3滴1N氫氧化鈉，使溶液透明，冷卻后加5毫升5%戊二醛，加二甲胂酸緩沖液或磷酸緩沖液（0.2M，pH7.2-7.6）使總體積到50毫升，并加25毫克無水氯化鈣。混合液的pH為7.2。本液對微管有良好的保存作用。
透射電鏡的成像原理
目前，主流的透射電鏡鏡筒是電子槍室和由6～8級成像透鏡以及觀察室等組成。陰極燈絲在燈絲加熱電流作用下發射電子束，該電子束在陽極加速高壓的加速下向下高速運動，經過第一聚光鏡和第二聚光鏡的會聚作用使電子束聚焦在樣品上，透過樣品的電子束再經過物鏡、第一中間鏡、第二中間鏡和投影鏡四級放大后在熒光屏上成像。電鏡總的放大倍數是這四級放大透鏡各級放大倍數的乘機，因此透射電鏡有著更高的放大范圍（200×～1000000×）。
透射電鏡的一般操作流程
接通電鏡工作電源后，電鏡開始通過機械泵抽前級和鏡筒真空，當鏡筒真空達到一定要求時，再由擴散泵抽鏡筒的高真空，當高真空能達到加高壓的要求時，面板上高真空指示燈點亮，表明此時可以加高壓了，接通高壓并調整高壓到合適的高壓值，稍等一會待高壓穩定后，再增加燈絲電流，使熒光屏中心產生一個明亮的光斑，隨后依次接通各級透鏡的工作電流，調整電鏡的工作狀態，調整好后再加入樣品進行觀察，并對感興趣的部位拍照記錄。電鏡使用完畢，應依次關閉高壓、燈絲加熱電流、關閉各級透鏡工作電流以及取出樣品。待冷卻水再工作10～15min后，關閉電鏡和冷卻水。
電鏡在 生物 醫學領域中的應用
17世紀光學顯微鏡的發明，促進了細胞學的發展，20世紀電子顯微鏡的發明，揭開了病毒和細胞亞顯微結構的奧妙。在20世紀60年代以來，電鏡廣泛應用于工農業生產、材料學、考古學、 生物 學、組織學、病毒學、病理學和分子生物學等眾多研究領域中。但電鏡技術從應用的廣度、研究的深度等方面看，沒有哪一個領域可與生物醫學相媲美。
1 在細胞學方面：由于超薄切片技術的出現和發展，人類利用電鏡對細胞進行了更深入的研究，觀察到了過去無法看清楚的細胞超微結構。例如，用電鏡觀察到了生物膜的三層結構以及細胞內的各種細胞器的形態學結構等。
2 電鏡在發現和識別病毒方面起到了重要作用：許多病毒，尤其是腫瘤病毒就是用電鏡發現的。電鏡也為病毒的分類提供了最直觀的依據，例如去年肆虐全球的SARS病毒就是首先在電鏡下觀察到并確認是病毒而不是支原體的。
3 在臨床病理診斷方面：生物體發生疾病都會導致細胞發生形態和功能上的改變，通過對病變區細胞的電鏡觀察就可以為疾病診斷提供有力依據。例如目前電鏡在腎活檢、腫瘤診治中發揮了重要作用。
4 電鏡技術與生命科學中新興起的技術相結合，促進了新技術的應用。例如電鏡技術與免疫學技術相結合產生了免疫電鏡技術，它可以對細胞表面及細胞內部的抗原進行定位，可以了解抗體合成過程中免疫球蛋白的分布情況等。
透射電鏡在生物醫學研究中的主要技術
1 常規超薄切片技術
一般的透射電鏡電子束的穿透能力較弱，大多數標本無法直接在電鏡下觀察，必須切成厚度為50~70nm的超薄片，這種制作超薄片的技術稱為超薄切片技術。在透射電鏡的生物醫學樣品制備方法中，超薄切片技術是最基本最常用的制備技術，其他一些樣品制備技術，如細胞化學技術，免疫電鏡技術及電鏡放射自顯影技術都離不開超薄切片的制作。利用透射電鏡觀察超薄切片，可以了解細胞的精細結構。
2 負染色技術
負染色技術也叫陰性反差染色，它是由Hall等首先采用的一種染色技術，與超薄切片法相比，該技術具有分辨率高、簡單易行和快速方便等優點。因此在生物學研究中廣泛應用。這種方法可以顯示大分子、細菌、病毒、原生動物、分離的細胞器及蛋白質晶體等樣品的形狀、大小和表面結構特征。尤其是在病毒學領域，有關病毒的分類及病毒亞單位結構的顯示、病毒與抗體的相互作用等的研究中，負染色更是不可缺少的實驗技術。
3 金屬投影與復型技術
金屬投影技術是利用真空噴鍍儀對樣品進行投影的一種技術，Williams首先用這種技術用于增加電鏡圖象的反差。該技術還可用來測量顆粒及大分子的大小。復型技術主要用于樣品表面結構的研究。某些堅硬的材料，如牙齒、骨骼、金屬等，它們是不透明的，并且很難制成超薄切片，對于這些材料可用一種電子透明的薄膜將其表面結構復制下來，即成復型。通過對該復型樣品的觀察，就可以了解原有樣品的天然斷面或人工斷面的結構特征。
4 冷凍切片技術和冷凍蝕刻復型技術
冷凍切片技術是使樣品迅速冷卻，然后用冷凍切片機進行冷凍切片，它省去了普通超薄切片中繁雜的化學固定與包埋操作。該技術在細胞化學研究中有著特殊用途。冷凍蝕刻復型技術是一種冷凍斷裂與復型相結合的樣品制備技術，該技術在生物學中的廣泛應用不僅驗證了超薄切片所展示的細胞超微結構，而且還揭示了某些前所未見的新結構，尤其是在顯示生物膜的結構方面，該技術有著獨特作用。
5 電鏡細胞化學技術
電鏡細胞化學技術又稱超微結構細胞化學技術，它是從光鏡組織化學的基礎上發展起來的一種超微結構技術，它的任務是研究細胞內各種成分在超微結構水平上的分布情況以及這些成分在細胞活動過程中的動態變化，以闡明細胞的化學和生化功能。其中最主要的是蛋白質（尤其是酶的細胞內定位），其次是核酸、脂肪、碳水化合物及無機離子的定位。該技術有利的促進了形態學和生物化學的結合，使生命科學的研究進入了新的水平。
6 免疫電鏡技術
免疫電鏡技術是通過特殊的標記方法使抗體與電子致密的標記物相結合，然后利用電鏡在超微結構水平上鑒定抗原-抗體的結合反應。在免疫學領域中，這是一種非常有用的實驗技術。
7 電鏡放射自顯影技術
電鏡放射自顯影技術是一種利用放射性 同位素 作為標記物對細胞化學物質進行超顯微結構的定位、定性或定量研究的技術。這種技術不僅用于對重要的代謝物質進行定位、定性或定量，而且還用于顯示抗原-抗體的結合， 激素 或藥物與受體的結合，顯示病毒的感染與復制部位等。因此這是一種非常有用的現代生物學技術。