(R)-甲氨蝶呤照高效液相色譜法(通則0512)測定。
供試品溶液取本品,加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含0.2mg的溶液對照溶液精密量取供試品溶液1ml,置100ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。系統適用性溶液取消旋甲氨蝶呤,加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含40g的溶液色譜條件用牛血清白蛋白鍵合硅膠為填充劑;以正丙醇-磷酸鹽緩沖液(pH6.9)(取0.71%無水磷酸氫二鈉溶液500ml,加0.69%磷酸二氫鈉溶液600ml,搖勻,用2mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至6.9)(8:92)為流動相;檢測波長為302nm;進樣體積20pl系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,出峰順序依次為(S)-甲氨蝶呤峰與(R)-甲氨蜾呤峰,其分離度應大于3.0。測定法精密量取供試品溶液與對照溶液,分別注人液相色譜儀,記錄色譜圖限度供試品溶液色譜圖中如有(R)-甲氨蝶呤峰,其峰面積不得大于對照溶液主峰面積的3倍(3.0%)。有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定。
供試品溶液取本品,加流動相溶解并稀釋制成每1mI中含1mg的溶液。對照溶液精密量取供試品溶液1ml,置200ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。系統適用性溶液分別取甲氦蝶呤與葉酸,用流動相溶解并稀釋制成每1ml中各約含0.1mg的混合溶液。色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-7.0%枸櫞酸溶液-2.0%無水磷酸氫二鈉溶液(8.5:10:80)(用7.0%栒櫞酸溶液或2.0%無水磷酸氫二鈉溶液調節pH值至6.0)為流動相;檢測波長為302nm;系統適用性溶液進樣體積10μl,其他溶液進樣體積50l系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,理論板數按甲氨蝶呤峰計算不低于1000,甲氨蝶呤峰與葉酸峰之間的分離度應大于8.0。測定法精密量取供試品溶液與對照溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍。限度供試品溶液色譜圖中如有雜質峰,單個雜質的峰面積不得大于對照溶液的主峰面積(0.5%),各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的4倍(2.0%)。水分取本品,照水分測定法(通則0832第一法1)測定,含水分不得過12.0%。熾灼殘渣取本品1.0g,依法檢查(通則0841),遺留殘渣不得過0.1%。重金屬取本品0.50g,加25%硫酸鎂的硫酸溶液(取硫酸鎂25g,加1mol/L硫酸溶液100m使溶解)4ml,搖勻,置水浴上蒸發至干,于800℃緩緩熾灼至完全炭化,熾灼時間不超過2小時,放冷,依法檢查(通則0821第二法),含重金屬不得過百萬分之五十。