用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗——三氯醋酸沉淀法

含蛋白質的樣品

100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）

1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；

2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30 min （或在冷凍箱內放置 15 min ）；

3. 10 000 ×g 離心 5 min；

4. 棄去上清并用吸管吸凈殘留液；

5. 將沉淀再懸浮于50～100％ 0.1N NaOH 溶液，混勻。

1. 用 TCA 沉淀蛋白質，所需最低的蛋白質濃度是 5 ug／ml。

2. 有時需要用 10％ TCA 或乙醇-乙醚（1：1）洗滌 TCA 沉淀的蛋白質，以除去 TCA。

3. 第 5 步不用 NaOH 溶液再懸浮 TCA 沉淀，而是用乙醇-乙醚（1：1 ）洗滌 TCA 沉淀 ，并用緩沖液再懸浮沉淀，可能更易操作。

4. 脫氧膽酸鹽三氯醋酸（DOC-TCA）沉淀法是 TCA 沉淀法的一種變通形式，它可用于濃度 為 1 ug／ml 以下的蛋白質濃縮，該法使用范圍更廣。

1 ml 樣品加 0.1 ml 0.15％ DOC。

混勻并在室溫下放置 10 min。

加 50 ul 100％ TCA，混勻并在 10 000×g 離心 5 min。

DOC-TCA 沉淀反應不能在 SDS 存在的條件下進行。