用堿水解和氯甲苯活化的固定化實驗

用這種方法酯鍵通過堿的處理被部分水解，用溶在丙酮中的對甲苯磺酰氯化物來活化，用羧基或羥基固定化酶到這個殘基上（圖 1）。

圖 1　通過氯化物的活化酶固定化到聚酯上

酶溶液

磷酸鉀NaClNaOH丙酮對甲苯磺酰氯化物

吸濾器玻璃料聚酯小片

實驗所需「試劑」具體見「其他」

1. 通過氯化物的堿解和活化

聚酯小片（每片 2 cm²，10 片）在室溫 10 ml 10％（質量濃度）NaOH 中孵育 10 min，其后聚酯在玻璃料上被充分沖洗和吸干，用水沖三次，再用丙酮沖五次，每次 10 ml。

沖洗后尚未干，小片立即轉移到 10 ml 溶有 100 g/l 甲苯磺酰基氯化物的丙酮中孵育 20 min。其后在玻璃料上用丙酮沖洗三次、水沖洗三次、pH 7.5 的 0.1 mol/L 磷酸鉀兩次，每次 10 ml。

2. 酶的固定

沖洗之后迅速添加酶溶液（大約 10 ml，聚酯小片必須完全沉浸）并在 4℃ 溫和的搖動中過夜。未結合的酶在吸濾器或玻璃料上先用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸鉀沖洗，再用 pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸鉀來沖洗，其后，儲存在緩沖液中，為了儲存更長的時間，可用水沖洗去除聚酯小片上的緩沖液，并在空氣中干燥。

試劑：

0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀

溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀

100 g/L NaOH

丙酮

溶有 100 g/l 對甲苯磺酰氯化物（Mr＝190.7）的丙酮