用玻璃紙瓊脂平板透析培養法觀察放線菌形態

（一）實驗目的：用放線菌的玻璃紙培養物觀察放線菌的個體形態

（二）實驗原理：

放線菌自然生長的個體形態的觀察現多用玻璃紙瓊脂透析培養法。

玻璃紙具有半透膜特性，其透光性與載玻片基本相同，采用玻璃紙瓊脂平板透析培養，能使放線菌生長在玻璃紙上，然后將長菌的玻璃紙剪取小片，貼放在載玻片上，用顯微鏡鏡檢可見到放線菌自然生長的個體形態。

采用插片培養法也能觀察放線菌的個體形態。

（三）實驗器材：

1、活材料：培養5-7天的紫色直絲鏈霉菌（Streptomyces violaceorectus）的斜面菌種、吸水鏈霉菌5102（Streptomyces hygroscopicus var.Yingchengensis(5102)）斜面菌種。

2、培養基：高氏一號瓊脂培養基（見附錄一、10）

器材：無菌平皿、玻璃紙、 9ml無菌水若干支、酒精燈、火柴、接種環、鑷子、玻璃刮鏟、1ml無菌吸管、剪刀、載玻片、顯微鏡。

（四）實驗方法：

（1）將玻璃紙剪成培養皿大小，用舊報紙隔層疊好后滅菌。

（2）將放線菌斜面菌種制成10^—3的孢子懸液。

（3）將高氏一號瓊脂培養基熔化后在火焰旁倒入無菌培養皿內，每皿倒15ml左右，待培養基凝固后，在無菌操作下用鑷子將無菌玻璃紙履蓋在瓊脂平板上即制成玻璃紙瓊脂平板培養基。

（4）分別用1ml無菌吸管取0.2ml吸水鏈霉菌（5102）孢子懸液，紫色直絲鏈霉菌孢子懸液分別滴加在兩個玻璃紙瓊脂平板培養基上，并用無菌玻璃刮鏟涂抹均勻。

（5）將接種的玻璃紙瓊脂平板置28—30℃下培養。

（6）在培養至3天，5天，7天時，從溫室中取出平皿。在無菌環境下。打開培養皿，用無菌鑷子將玻璃紙與培養基分離，用無菌剪刀取小片置于載玻片上用顯微鏡觀察。

（五）實驗作業

（1）繪出吸水鏈霉菌（5102）和紫色直絲鏈霉菌自然生長的個體形態圖。

（2）為什么在培養基上放了玻璃紙后，放線菌仍能生長？

附：插片培養法：

放線菌的插片培養是將放線菌菌種制成孢子懸液后（濃度以10^—2—10^—3為好），取0.2ml放在適合放線菌生長的平板培養基上，用玻璃刮鏟涂布均勻，然后將滅過菌的蓋玻片斜插入固體培養基中，置28—32℃下培養，3—5天后取出蓋玻片放在載玻片上鏡檢，可見放線菌的自然生長的個體形態。