用顯微鏡進行尿液分析的載玻片系統之比較

80 年代初期，我們發展了常規尿液分析的鏡檢化標準系統。1986 年，我們報告指出，手工的載玻片系統是可行的，并遠遠超過傳統的22×22-mm 玻片方法。自此以后，不斷出現的證據顯示，傳統的〃l-drop〃方法是不精確的，不可以作為標準的技術。一些研究者呼吁就手工與自動化進行尿液鏡檢的標準化程序進行更深入的比較分析。

　　最近，兩種新的手工和半自動尿液鏡檢分析系統被引入實驗室。Cen-Slide 系統簡便、易用、安全，是一封閉系統，省卻了移注、吸液等過程。它由一塊平整的載玻片組成（此組件是消耗品）。

　　R/S2000 系統含一個結構完整的工作站系統。這一系統包括一個蠕動泵、閥門、電路以及一封閉的光學玻片裝置，摒棄了吸管、玻片等消耗品，兩個生產廠家均與KOVA 系統進行了比較。

　　以下, 我們就五種儀器的物理性特征進行比較。

　　Uri-Slide, KOVA ， Count-10 ， Cen-Slide,　R/S2000

材料和方法

　　我們研究了廠商的技術信息、標準化尿液常規分析的過程、步驟。尿液診斷細胞病理學實驗室按以下的方法采集尿液標本和細胞懸浮液。從新鮮血樣中制備低濃度的紅細胞懸浮液。用己知膿尿患者的尿樣進行低濃度白細胞的評估，適度稀釋。用寶靈曼的尿＋試條測試，測得1+、1-2+的結果。根據廠商指示，所有試條反應在推薦的間隔期內作記錄。

就以下參數進行評估：
*開放式、封閉式
*每例的載玻片數、每一玻片可做的最大病例數
*玻璃或塑料的夾子、玻片
*格柵
*估計的沉渣量
*可觀察的平面視野
*箱的深度
*顯微鏡焦面的數量

　　載玻片的數量在廠商的信息資料中己有報告。我們測量了顯微鏡的表面面積和平均結果。Nikon　Ladopht 顯微鏡適用于低倍視野（LPFS）和高倍視野（HPFS）。我們用含大量紅細胞、白細胞、管型的沉渣尿樣評估焦面的數量。

　　為確定每一系統的精確性，我們用低濃度的紅、白細胞樣和標準的制備方法。我們精確的將每份10毫升充分混勻的懸浮液倒入一次性的離心管中，除Cen-Slide 外（因其具備自己的離心管和觀察管）。五個顯微鏡系統自動進行分析，并按以下的順序測試：Uri-Slide,KOVA,Count-10,Cen-Slide,R/S2000.在進行了紅、白細胞的10 次單項測試后確定變異系數。在五次隨機讀取HPFS 結果后，評估分配量、每一LPF 報告管型的數量。細菌、真菌、晶體、粘液和上皮細胞在每一HPE 下分級為0-4+等級。

　　將己知含有粘液、晶體尿、血尿、膿尿、菌尿、管型、上皮細胞的尿樣稀釋至3mL，每個系統均可對豐富的沉渣成分自動進行分析。我們評估沉渣的分布以及對以上提及的成分的目視分類進行鑒定。

結論

物理特征：

　　沉渣量及分布：每個玻片系統的物理特征以及區別如表1 所示。低細胞性及高細胞性尿樣標本的量無顯著性差異。我們發現，R/S2000 對單層沉渣的輸送控制得最好。開放式系統需具備更高的操作技能。總之，沉渣的初期運輸對開放式系統而言相對困難。

　　R/S2000 能持續性對沉渣進行完全分配。另外，此系統只需具備一般的操作技能即可，這主要歸因于其儀器部分能自動地對沉渣進行裝載。其它系統是手工操作，因此要求較高的操作技巧，而且因人而異。R/S2000 對多標本的觀察，只需很短的時間。

　　顯微鏡觀察視野：Uri-Slide的觀察視野最寬，可達90mm2, Cen-Slide為88 mm2，R/S2000 為38 mm2。Count-10 和Cen-Slide可觀察的焦面數量很多。所有的系統在30 秒內均可觀察到單層的細胞。

顯微鏡法：

　　顯微清晰度：玻片的材料組成如表1 所示。R/S2000 有一永久性的玻璃容器，與塑料片相比較，R/S 由于具備高質量的光學玻璃片而致其影像的清晰度非常高。

　　紅細胞尿：略。結果如表2 所示。總之，所有系統很易識別紅細胞、同形的紅細胞，即使是扁形的也能與異形的紅細胞區分開來。

　　白經胞尿：表3 顯示鏡檢低濃度白細胞尿樣的結果。微量至1+，1 至2+的白細胞酯酶與HPF下的白細胞數相關。范圍、平均值和CVS均在表3 中顯示。Cen-Slide的CV值最高。

　　白細胞形態在所有系統中均相似。WBCS 能區別于RBCS 和Urothrlial 細胞，與細胞診斷尿分析法相比較，所有系統都顯示出WBC 很難與腎小管細胞區分開來。

　　己知細胞型樣本：表4 總結了確定沉渣成分的步驟。所有系統均能識別普通的沉渣成分，但是，這些系統不能鑒別上皮細胞的改變以及腫瘤細胞的變化。顯微鏡不能識別細胞核和胞漿的特征。

討論

　　用顯微鏡檢查尿沉渣最重要的是區分正常與異常的沉渣成分。如確定是否有特殊的增長或判斷某種沉渣細胞的存在或確定這種增長是否指示尿道的病理特征，這樣，沉渣的檢測結果必須精確、準確、重復性好。尿液鏡檢學家應發展、完善實驗室程序，促進對疾病的準確識別和診斷。

　　我們評估了兩種新型、封閉的顯微鏡玻片系統用于常規的尿液鏡檢（R/S2000 和Cen-Slide）。R/S2000由于具備高質量的玻片，其光學分辨度很高。由于具備高質量的玻片，其光學分辨度很高。由于兩種儀器均是封閉的，這樣，在標本處理上很安全，省卻了移液管、玻片裝置、夾片等。R/S2000 在數秒內顯示尿沉渣結果，并只有1 個至2 個焦面。

　　從技術上講，很多的步驟需要使用開放的系統。比較而言，R/S2000 操作更簡便，無需培訓，忽略人為因素造成制備沉渣玻片的技術性差異。在1974 年，Winkeley 其同事報告指出尿液鏡檢是不精確的。由于技術的差異、沉渣的量、對發現沉渣的結果的整理以及顯微鏡的差異均造成鏡檢結果不精確。R/S2000解決了大部分這樣的問題。

　　血尿和膿尿是尿道疾病的重要臨床指征。在研究人員的辦公室和臨床實驗室經常對血尿和膿尿進行鑒定。正常人尿液中，每HPF 下至多可發現3 個紅細胞、2 個白細胞。如果每HPF 下出現3 個以上的紅細胞，提示有必要對泌尿生殖道進一步鑒定。然而其它的研究人員用這些系統鑒定得出高水平的RBCS 和WBCS，所以我們的研究必須確定介于正常與異常交叉地帶的紅、白細胞水平的判斷。R/S2000、KOVA 和Uri-Slide 系統測出的結果相似。CVS 具可比性，除Cen-Slide 系統具較高的CV，表5 顯示廠商提示的常規鏡檢項目的范圍。

　　實驗室應制定常規尿液檢查及急診尿檢的標準。在檢測己知的尿液成分的情況下，R/S2000 的檢測結果具可比性，且被特異性細胞尿液診斷結果所確認。

　　我們認為R/S2000 無顯著性缺陷。我們示對清潔和保養作評估。含大量粘液和纖維的標本需要充分清洗系統，以防交叉污染。這并不成問題，因為每個清洗耳恭聽過程僅需6 秒。Cen-Slide 的最大缺陷是不能適用于各種顯微鏡。

　　70 和80 年代，臨床實驗室往往選擇性地決定哪些尿液標本需要鏡檢。在1979 年，提出了宏觀進行尿液分析，并且作為一種篩選的方法。顯微鏡檢查只在分析儀檢查結果呈陽性或己知患者有腎臟或尿道疾病時使用。從此以后，檢測程序有了改進傳統的方法進一步制定標準化的鏡檢程序。這兩種新型的封閉式系統的最重要的特征就是能快速鑒定尿液沉渣成分。當我們處理前線的尿液測試診斷，用R/S2000 系統可提高區分正常、異常尿標本的效率。這些新的系統提供實際、有效的方法快速鑒定沉渣成分，并監測
微量血尿、膿尿、尿道疾病、結晶尿以及上皮細胞的變化等，這些系統應能引起實驗室的特殊興趣。

表1： 常規尿液檢測中傳統非標準確性方法與標準方法的比較

表2： 五種顯微方法檢測尿液紅細胞的比較

表 3 ： 五種顯微方法檢測尿液白細胞的比較

表 4 ： 常規顯微尿液檢測的有關參數

表 5 ： 標準試條實驗與四種顯微尿液檢測方法和尿液細胞診斷比較