用于基因芯片分析的血液樣品的準備可用于：（1）基因表達分析；（2）分析血液中白細胞的基因表達情況。
| 實驗方法原理 | 基因芯片(genechip)（又稱DNA芯片、 生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是 雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的靶 核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置的核酸探針產生互補匹配時，通過確定熒光強度最強的探針位置，獲得一組序列完全互補的探針序列。據此可重組出靶核酸的序列。 |
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| 實驗材料 | 血液樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | 淋巴細胞分離液滅菌生理鹽水Trizol |
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| 儀器、耗材 | 離心機 |
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| 實驗步驟 | 1、將2 mL抗凝血（肝素或者EDTA鹽抗凝都可），以3,500 轉/分，離心10分鐘。將會看到血液分為2層，上層是淡黃色的血漿，約占60%，
2、用巴士滴管或吸管將上層血漿吸出，還剩約1ml血細胞層，在血細胞層中加入1：1體積，即約1ml的滅菌生理鹽水，混勻。
3、以下是把12ml生理鹽水與血細胞混合物（相當于12ml全血）合并成一管后分離白細胞過程。將24 mL淋巴細胞分離液（是全血體積的2倍）預先加入滅菌的50 mL 離心管中。將與生理鹽水混合的血細胞緩慢加入淋巴細胞分離液液面上，注意盡量不要讓血細胞層摻入到淋巴細胞分離液層去，此過程可見圖3；然后以1500轉/分，離心20 分鐘（離心機要求水平轉頭）。可以看到液體分為三層，上層是淡黃色的血漿，中間一層乳白色，最下面一層是紅色的血細胞。在中間層和上層交界處是有一層白色的膜，即白細胞層，同時在明顯的白細胞層下面有較厚的乳白層液體，此層液體中也含有白細胞，但量較少，若血液足夠，可以考慮不要此層（若白細胞層不很明顯而乳白色液體層太厚，可以2500轉/分，繼續離心10 分鐘以加強白細胞的分離效果）
4、用巴士滴管或移液器收集界面上的白細胞層，放入滅菌的1.5 mL EP離心管中，以 10,000 轉/分，離心5 分鐘，吸掉上清。可見白色的沉淀，有時白色的沉淀上還混有紅色的血細胞（少量紅細胞無妨）.
5、去上清液，在細胞沉淀中，加入1ml Trizol試劑，用移液器充分抽打，混勻，直到形成清亮不粘稠度的液體（表明細胞被充分溶解，基因組DNA被充分打斷）
6、后續可以按照Trizol試劑的標準操作抽提總RNA。也可以把此Trizol試劑保存在生物冰（低于15℃即可）郵寄給我們，由我們來完成后續的抽提過程。一般每5 ml全血可以得到10-15ug總RNA。
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| 注意事項 | 1、 淋巴細胞分離液一般要求保存在4℃中。淋巴細胞分離液從冰箱取出后，不要馬上應用，以避免對細胞冷的刺激，引起基因表達的改變。需待溶液溫度升至室溫時，混勻后使用。
2、整個分離過程中，溫度應在18-28℃；溫度過高與過低均影響分離質量。
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| 其他 | 1. 在一些方法中，是在全血中直接加淋巴細胞分離液后離心分離紅細胞；這樣得到的白細胞沉淀中帶有較多的血漿蛋白，影響RNA的抽提，因此我們建議用以上方法，先把血漿棄去后再加淋巴分離液。
2. 在一些方法中，分離得到的白細胞先用RNAlater保存進行運輸；由于分離的白細胞往往污染有紅細胞，紅細胞會影響 RNAlater的保存效果；另外，保存在RNAlater中的白細胞在重新回收提取RNA時還有部分損失。
因此若實驗室有Trizol試劑，我們建議直接用Trizol試劑把白細胞溶解，在Trizol試劑中的RNA是相對穩定的，-20℃可以保存一個星期，-70℃可以保存一個月。 展 |
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