瑞氏染色是目前最常用而又最簡單的染色方法。
原理：
瑞氏試劑中之酸性伊紅和堿性美籃混合經化學作用后，變成中性之
伊紅化美藍，久置后，經氧化而含有天青。此三種染料分別和細胞核及漿中的NH3+和COO-等結合，使細胞核及胞漿著色。由于系中性染料，又有緩沖液調節酸堿度，所以細胞受染后，藍紅等顏色都較適中，核染質、胞漿及其中之顆粒顯色較為清楚。
瑞氏（ Wright ' sstain ；美藍－伊紅Y）染色：
1 ．瑞氏染料是由堿性染料美藍（ Methvlem blue ）和酸性染料黃色伊紅（ Eostm Y ）合稱伊紅美藍染料即瑞氏
（美藍－伊紅Y）染料。
伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是堿性的，美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。
2 ．用 甲醇作瑞氏染料溶劑，即成瑞氏染液。
甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：
（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。甲 醇 ME
（瑞氏染料）—— —— → M + + E -
在配制的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多余美藍就可以
使胞漿染成藍色，染色主要是化學作用，是離子彼此結合的反應。
（ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應。
3. 瑞氏染液配制：
(1) 瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm 或 1g 甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先稱干燥（事先放入溫箱干燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內，用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲
即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入
一
清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存
3 個月以上為佳。
(2) 緩沖液：
1) 緩沖液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH 值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩沖液須保持 一定的
pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在6.4~6.8 ，偏堿性染料可與緩沖液中 酸基起
中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使 pH 恒定。
2) 緩沖液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）
配方 1 ： 1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
配方 2 ：1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml 置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染則應報廢