操作步驟:
1.滴加瑞氏吉姆薩A液(約0.5ml-0.8ml)涂片上,并讓染液覆蓋整個標本染色1min;
2.
再將瑞氏吉姆薩B液加于A液上面(滴加量為A液的2-3倍),以嘴或洗耳球吹出微風使液面產生漣漪狀,使兩液充分混合,染色3-10min。(染血片時間可略短,染骨髓片時間應視細胞量多少而異)
3.水洗(沖洗時不能先倒掉染液,應以流水沖去,以防有沉渣沉淀在標本上),干燥、鏡檢。
注意事項:
1.
染色時間須視何種標本,涂片厚度,有核細胞多少,何種細胞及室溫等而定;通常染血液涂片時滴加B液后染2-4分鐘,染骨髓片則應不少于8分鐘;氣溫較低時,可適當延長染色時間。染色結果如出現嗜酸性粒細胞變堿,則考慮是否染色時間太長所致。
2.做骨髓涂片時,因為骨髓纖維蛋白含量較高,凝固較快,所以涂片過程要快。骨髓不可用草酸鹽抗凝,否則會使血細胞核變形,核染色質致密,胞漿空泡形成,出現草酸鹽結晶。
3.染液量需充足,勿使染液蒸發干燥,以防染料沉著于涂片上。
4.做細胞染色時,當天氣寒冷或濕度較大時,應于37℃溫箱中保溫促干,以免細胞變形縮小或在染色時脫片。
5.染料放置時間越長,染色效果越好。
6.
本試劑應由專業人員使用。
拓展資料
Wrfeht和Giemsa都于1902年報告了各自的新的血液學染色劑,其主要特點是在制備多色性亞甲藍(主要指天青B)方面做了改進,使血細胞和瘧原蟲著色較好,操作簡便。
上述染色法均是含伊紅和亞甲基藍衍生物的復合染料。在臨床檢驗工作中,瑞氏染色法常用于血液、其他體液、分泌物和排泄物涂片中各種細胞的染色,有利于在顯微鏡下觀察細胞形態及對細胞進行分類檢查。
【染色原理】
瑞氏染色分兩相進行,第一相是酸性染料伊紅與細胞中的堿性物質如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結合;堿性染料天青B與細胞中的酸性物質如核染色質(chro-matin)、特異中性顆粒、血小板及富含核蛋白的胞質結合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復合物(azure
B-eosin
complex),這種復合物是形成Romanowsky-Giemsa效應的基礎。
Romanowsky-Giemsa效應包括:①白細胞核染色質染成紫色,瘧原蟲的染色質染成紅色;②中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區染成紫色;③產生本效應必須有兩種染料參與,一種是天青B,另一種是伊紅。
Wittekind(1985)指出,天青B與DNA分子中的磷酸基結合,而伊紅既與DNA分子中的陽離子部位結合,又與天青B結合,與天青B的結合力來源于電子供一受體的電子轉移力,天青B的甲氨基(-NHCHs)與伊紅分子中的叛基(-COOH)間形成氫鍵。因此,天青B是噻嗪類染料中能與伊紅形成復合物的最佳選擇,因為擁有四個甲基側鏈的亞甲藍不能以氫鍵與伊紅結合。
甲醇除作為染料的溶劑,能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負電荷伊紅外,因其具有脫水力,還可將細胞固定為一定形態,并使蛋白沉淀為顆粒狀、網狀結構,增加細胞與染料的接觸表面,增強染色效果。
細胞中的各種有機物質(特別是蛋白質)、染料等對環境的州值非常敏感。如環境偏酸,氫離子增多,降低對堿性染料的親和力;增強伊紅著色,出現異常紅染;相反,則可出現異常藍染。最佳環境應維持在PH值6
4~6、8.因此,必須使用緩沖溶液。