牙髓干細胞DPSCs的凍存與復蘇_DPSCs的凍存

牙髓組織

滅菌PBSA用冰預冷的凍存液I用冰預冷的凍存液II胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶0.54mmol L(0.2%)EDTA 無Ca2+和Mg2+的Hank’s平衡鹽溶液溶解

1.8mL凍存管

(a)用PBSA洗培養瓶/皿三次。

(b)加足夠的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。

(c)在80%的貼壁細胞從培養表面脫離時，加人MSC培養基。

(d)500g離心6min。

(e)倒掉上清，用冰上預冷的凍存液I重懸細胞。

(f)細胞計數，然后稀釋或濃縮細胞到終濃度的2倍。繼續將裝有細胞的試管放置在冰上。

(g)在冰上邊轉動試管邊緩慢加人等體積的凍存液II。

(h)等量按份加人凍存管。

(i)將凍存管放入程控降溫儀。慢速冷凍盒和-80℃冰箱也可用于降低冷卻速度。將凍存管放人液氮長期儲存。