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    發布時間:2021-03-01 19:31 原文鏈接: 熱點課題研究之慢病毒載體的使用與技術展望(一)

           在我們的課題研究中,很多小伙伴們應該都涉及到基因功能的研究。在基因功能研究過程中,我們少不了要去給這個基因進行過表達、敲除或者敲低的操作。這樣我們就需要構建表達載體(過表達,敲除或者敲低),并將構建好的表達載體轉染至我們的細胞或者實驗動物內,進而便可研究我們的基因在細胞或者生物體內所執行的功能和扮演的角色。

     

           可在構建表達載體的時候 ,我們要如何選擇合適自己實驗需要的載體呢?載體可分為病毒載體和非病毒載體,病毒載體又分為慢病毒載體、腺病毒載體和腺相關病毒載體等。今天我們就來說說病毒載體中的慢病毒載體。

     

           一、慢病毒

     

           逆轉錄病毒(Retrovirus):是一種RNA病毒,在復制時需在逆轉錄酶的作用下首先將RNA轉變為cDNA, 再在DNA復制、轉錄、翻譯等蛋白酶作用下擴增。主要包括RNA腫瘤病毒、慢病毒及泡沫病毒等三種亞科。

     

           慢病毒(Lentivirus):屬于逆轉錄病毒科,名稱源自該種病毒長達數年的潛伏期。

     

           最經典的慢病毒是由HIV病毒改造而來,而且HIV-1/HIV-2系統也得到了廣泛的應用,除了HIV病毒系統以外,后續還有猿類免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus, SIV)載體系統、貓免疫缺陷病毒(felines immunodeficiency virus, FIV)載體系統、綿羊梅迪-維斯納病毒(MMV)載體系統和馬傳染性貧血(EIA)載體系統等。

     

     

           慢病毒結構:

     

           2個調節基因:

     

        (1)tat基因:反式激活因子,對HIV基因起正調控作用。

     

        (2)rev基因:病毒蛋白表達調節因子,增加gag和env基因對結構蛋白的表達。

     

           4個輔助蛋白(附屬)基因:

     

        (1)vif和vpu調節感染性病毒顆粒的產生;

     

         (2)vpr和nef參與疾病的表現。

     

     

           慢病毒的優勢:

     

           1.慢病毒攜帶的基因組可整合到宿主基因組,使宿主細胞長時間穩定表達外源基因;

           2.可感染分裂和非分裂細胞;

           3.低免疫原性,直接注射活體組織不易造成免疫反應,適用于動物實驗;

           4.可以更換特異性啟動子;

           5.野生型的HIV大小約為9.8 kb,插入片段可長達5-6 kb;


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