液相色譜柱的選擇、使用、保護和常見故障的掃除

液相色譜柱的選擇、應用、保護和故障排除一般分為正柱和反相柱。

正相柱多為硅膠柱，或硅膠表面帶有CN，-NH3等官能團的鍵合硅膠柱。反相柱主要以硅膠為填料，非極性十八烷基官能團(ODS)為C18柱。其他常用的逆柱是C8、C4、C2和苯基柱。還有離子交換柱、GPC柱、聚合物填充柱等。本文介紹了反相色譜柱的選擇和應用.

一、反相色譜柱的挑選

1.柱子的PH值運用規模 　　反相柱長處是固定相安穩，運用廣泛，可運用多種溶劑。但硅膠為基質的填料，運用時必定要留意活動相的PH規模。通常情況下，C18柱的pH值為2~8，活性相的pH值小于2，這將導致鍵合相的水解；當pH值大于7時，硅膠容易溶解；緩沖固定相常用于降解。一旦發生這種情況，列總數就會下降。同一填料不同等級的色譜柱是不同的。如果活性相PH值較高或經常使用緩沖液，則建議選擇較大PH值的色譜柱，如Diane的贊許柱PH 2 9或Zorbax PH 2 11。 5的柱子。

2.填料的端基封尾（或稱封口）

采用封口技術，利用填料中殘留的硅羥基封接端基，可改善極性化合物的吸附或尾礦，增加碳含量，不易貯存，填料穩定性好，組分保存時間好。如果要分析的樣品是酸性或堿性化合物，好使用端到端密封的填料塔。

二、液相色譜柱的運用

在使用色譜柱之前，好對色譜柱的功能進行測試，并將測試結果保存下來，作為今后評估色譜柱功能變化的參考。柱函數測試應根據色譜柱工廠報告中的條件(工廠試驗中使用的條件為佳條件)進行，只要測量結果具有可比性。然而，應該注意的是，柱的功能可能會因樣品、活性相、柱溫度和其他使用條件的不同而有所不同。

1、樣品的前處理

好運用活動相溶解樣品。

預處理柱用于去除樣品中的強極性或柱填料的不可逆吸附。

采用0.45μm濾膜去除顆粒雜質。

2、活動相的制造

液相色譜是指樣品組分在柱填料和活性相之間進行質量交換以達到分離的目的，因此活性相必須具有以下特性：

答：活性樣品相對于樣品具有一定的溶解性，這可以確保樣品成分不會被存放在柱中(或在柱中保存很長時間)。

活性相和樣品不發生化學反應。

為了獲得良好的分離效果，活性相的粘度應盡可能小；降低塔的壓降，延長泵的使用壽命(可采用遞升溫法降低活性相的粘度)。

活性相的物理化學性質應與所使用的檢測器相適應。優選地使用低紫外吸收的溶劑來使用紫外檢測器。

即活化相的沸點不能太低，否則容易產生氣泡，不能進行試驗。

在生產活動階段后，必須對其進行脫氣處理。去除活性相中溶解的微量氣體不僅有利于檢測，而且可以防止微量氧對樣品的活性相的影響。

3。運動相速度的選擇是柱內運動相線速度的函數，采用不同的流速可以得到不同的柱效應。對于特定的液相柱，為了找到的柱效，好采用佳的流速。對于內徑為4.6mm的液相色譜柱，流速為1ml/min，內徑為4.0mm時，流速為0.8mL/min。 　　當選用流速時，剖析時刻或許延伸。改變流動相洗滌強度的方法可以縮短分析時間(例如，在使用反相柱時，可以適當增加甲醇或乙腈的含量)。

試驗前，活性水相的制備效果好，特別是在夏季使用緩沖溶液作為活性相時。添加疊氮化鈉以防止細菌生長是好的。

流動相要求使用0.45μm的濾膜來去除顆粒雜質。

運用HPLC級溶劑制造活動相，運用適宜的活動相可延伸液相色譜柱的運用壽數，進步柱功能。

三. 液相色譜柱的保護

1. 液相色譜柱的平衡

反相液相色譜柱在乙腈/水中保存，經工廠檢驗。柱應用甲醇或乙腈柱體積的10-20倍洗滌。請確保在樣品分析中使用的流動相和乙腈/水是相容的。每天有足夠的時間來平衡液相柱和流動相，您將在處理問題時獲得大的“補償”，您的液相柱的使用壽命將變得更長！業務步驟：

使用流動相平衡液相色譜柱，流速在平衡開始時緩慢增加，直到達到穩定的基線(如果緩沖鹽或離子對試劑的流速較低，則需要較長的時間來平衡)。

如果活性相含有緩沖鹽，則應注意純水的“過渡”，即需要用純水沖刷30分鐘以上才能開始日常分析。分析后，需要用純水清洗柱30分鐘，除去鹽緩沖液，然后用甲醇沖洗柱30分鐘。

2. 液相色譜柱的再生

對于長期液相色譜柱，柱效率往往降低(理論塔板數減少)。液相色譜柱可以再生，在有條件的實驗室中，應該使用廉價的泵來再生色譜柱。

建議用來沖刷柱子的溶劑體積

液相色譜柱的大小。柱體積中所用溶劑的體積。

125-4mm 1.6ml 30ml

250-4 mm 3.2ml 60ml

250-10mm 20ml 400ml

挑選再生辦法：

極性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料）的再生： 　　正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

非極性固定相(如反相色譜填料RP-18、RP-8、CN等)的再生：水/乙腈/氯仿(或異丙醇)/乙腈/水

當NH2改性的液相色譜柱再生時，由于NH2可能以銨離子的形式存在，洗滌后應先用0.1M氨洗，再用水洗，直至堿液完全排出。

0.05M稀硫酸可用于凈化被污染的液相色譜柱。如果有機溶劑/水的簡單處理不能完全去除吸附在硅膠表面的雜質，則洗滌后用0.05m的稀硫酸進行洗滌是非常有效的。

3. 液相色譜柱的保護

用柱前保護分析柱(硅膠在極性活性相/離子活性相中有一定的溶解度)

大多數反相液相色譜柱的pH穩定尺度為2~7.5，盡量不超過液相色譜柱的pH尺度。

防止活動相組成及極性的劇烈改變

活動相運用前有必要經脫氣和過濾處理

如果使用極性或離子緩沖溶液作為活性相，則在測試結束時，色譜柱應清洗干凈，并儲存在甲醇或乙腈中。

氯化物的溶劑對它有一定的腐蝕性。因此，需要注意的是，為了防止腐蝕，柱和連接管在很長一段時間內不能保持這樣的溶劑。