液相色譜的常規維護及保養

一：意義

高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。對儀器進行定期的維護和保養可提高儀器的使用壽命，使儀器穩定的工作以得到穩定可靠的數據。

二：高壓恒流泵的維護和保養

1.高壓恒流泵為整個色譜系統提供穩定均衡的流動相流速，保證系統的穩定運行和系統的重現性。高壓輸液泵由步進電機和柱塞等組成，高壓力長時間的運行回逐漸磨損泵的內部結構。在升高流速的時候應梯度升高，最好每次升高0.2mL/min，當壓力穩定時再升高，如此反復直到升高到所需流速。

2.特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇或甲醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。

3.在儀器使用完了以后，要及時清洗管路并沖洗泵，保證泵的良好運轉環境，保證泵的正常使用壽命。

三：色譜柱的維護和保養

1.所使用的流動相均應為HPLC級或相當于該級別的，在配置過程中所有非HPLC級的試劑或溶液均經0.22um薄膜過濾，而且流動相使用前都經過超聲儀超聲脫氣后才使用。

2.所使用的水必須是經過蒸餾純化后再經過0.22um水膜過濾后使用，所有試液均現用現配。并且在進樣的樣品都必須經過0.22um薄膜針筒過濾后進樣。

3.所使用到的最大流速為1.0mL/min，所以流速提升過程應是梯度提升，不存在流速的突升突降。

4.儀器檢測完，需要用流動相梯度洗脫色譜柱1小時以上。

四：常見問題及解決方法

（一）壓力過高

這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高。

1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。

(1).首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查；

(2).打開Purge閥，使流動相不經過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI以下，過濾白頭正常，在檢查；

(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。問題無法解決可考慮更換色譜柱。

（二）壓力過低

1、一般是由于系統泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。拆下柱子加適當力擰緊或襯四氟薄膜。

2、泵里進了空氣，但此時表現的往往是壓力不穩，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

3、無流動相流出：檢查儲液瓶中有無流動相，沉子是否浸在流動相中，泵是否運行。

4、參比閥未關閉：將流速降低后關閉參比閥。一般降至0.1～0.2mL/min后關閉參比閥。

（三）基線漂移

基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題,在實際工作中,我們經常能遇到基線漂移的情況,特別是在梯度洗脫的時候,基線漂移是常有的事。一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下（220nm）平衡時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發現基線漂移，則你要考慮下面的原因：

1、柱溫波動 控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。

2、流通池被污染或有氣體 用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池（最好斷開柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。

3、紫外燈能量不足 更換新的紫外燈

4、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成。 檢查流動相的組成，使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。