測定動物源食品中甲狀腺抑制劑殘留量實驗

動物組織 牛奶 尿樣

五氟芐基溴 N-甲基-N-三甲基硅基-三氟乙酰胺 乙醇鈉 乙醇 硅膠

固相萃取空柱 均質器 離心試管 色譜柱

1.  試劑和材料
 

衍生化試劑1:五氟芐基溴（PFBBr）（pentafluorobenzyi bromide，97%）。
 

衍生化試劑2: N-甲基-N-三甲基硅基-三氟乙酰胺（MSTFA）[N- methyl-N-（trimethylsilyl）-trifluoroacetamide,97%]。硅膠：40 ～ 63 um，10 nm （100A）。乙醇鈉/乙醇：稱取0.2 g NaOH溶于無水乙醇并定容至50 mL。固相萃取空柱（6 mL，10 mL）。內標物：雙甲基硫氧嘧啶（DMTU）。
 

2.  前處理
 

方法1:（動物組織）用均質器將動物組織樣品研磨成漿狀，稱取0.5 g于研缽中，加入1 ug/mL內標DMTU甲醇溶液50 uL并與2.0 g硅膠混勻，室溫放置3 min左右后裝柱，用淋洗液洗滌研缽并上柱。10 mL氯仿淋洗，6 mL含30%甲醇的氯仿（V/V）混合溶劑洗脫。吹干洗脫液，加入0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液5000 uL、PFBBr25 uL，25 ℃水浴中衍生10 min。用HCl將PH值調至3.0（±0.3）3 x 1 mL二氯甲烷提取，合并提取液并吹干。6 mL硅膠小柱依次用5 mL乙酸乙酯、5 mL正己烷活化；1 mL 二氯甲烷溶解殘留物后上樣；5 mL氯仿淋洗，5 mL 二氯甲烷-乙酸乙酯（1 + 4）的混合溶劑洗脫。吹干洗脫液，加入50 uLMSTFA、50 uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完畢，用正己烷定容至10 mL，待 GC-MS分析。
 

方法2 （動物組織）準確稱取2.0 g勻漿后的動物組織于50 mL離心試管中，加入1 ug/mL內標雙甲基硫氧嘧啶甲醇溶液50 uL，3x 5 mL乙腈提取，合并提取液并吹干。600 uL水溶解殘留物后傾入研缽中，并與2.0 g硅膠混勻，室溫放置30 min左右后裝柱。10 mL氯仿淋洗，6 mL含20%甲醇的氯仿混合溶劑洗脫。吹干洗脫液，加入 0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液50 uL、PFBBr25 uL，25 ℃水浴中衍生10 min。用HCl將pH值調至3.0（±0.3），3 x1 mL二氯甲烷提取，合并提取液并吹干。加入50 uL MSTFA,5O uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完畢，用正己烷定容至1 mL，待GC-MS分析。
 

方法3 （牛奶和尿樣）準確量取0.6 mL牛奶或尿樣加入研缽中，加入1 ug/mL內標DMTU甲醇溶液50 uL并與2.0 g硅膠混勻，室溫放置30 min左右后裝柱，用淋洗液洗滌研缽并上柱。用含5%甲醇的氯仿溶液（V/V）淋洗柱子，20%甲醇氯仿（V/V）溶液洗脫，收集洗脫液。吹干洗脫液，加入0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液50 uL、PFBBr25 uL，25 ℃水浴中衍生10 min。用 HCl將PH值調至3.0（±0.3），3 x1 mL二氯甲烷提取，合并提取液并吹干。加入50 uL MSTFA、50 uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完畢，用正己烷定容至1 mL，待GC-MS分析。
 

3.  儀器條件
 

(1)色譜條件
 

色譜柱：DB-5MS，30 m x 0.25 mmx0.25 um；
 

色譜柱程序升溫：100 ℃恒溫2 min，15 ℃/min升至260 ℃，10 ℃/min升至290 ℃，恒溫5 min；

進樣口溫度：250 ℃；

進樣方式：不分流進樣，不分流時間2 min；

載氣：高純氦氣，純度>99.99%；

進樣量：10 L。

(2)質譜參數

四級桿質譜，E1電離源，電離電壓70 eV，發射電流150 mA，檢測電壓500 V，離子源溫度200 ℃；傳輸線溫度250 ℃。選擇離子掃描（m/z）甲巰咪唑：241、261、275、294； 2-硫尿嘧啶：360、365、380、381；甲基硫氧嘧啶：374、379、394、395；丙基硫氧嘧啶：402、407、422、423；苯基硫氧嘧啶：436、441、456、457；內標 4（5，6）-雙甲基硫氧嘧啶：388、393、408、409。