流式細胞術數據分析知識匯總（五）

1、細胞增殖檢測

CellTrace細胞增殖試劑盒含有細胞膜通透性非熒光酯，可通過擴散透過細胞膜進入細胞，并與胺基反應形成熒光分子。這種無熒光的酯進入細胞后，可被細胞內酯酶轉化為熒光產物。活化的琥珀亞胺酯與蛋白質中的胺基基團共價結合，使染料能夠長時間保留在細胞中。

隨著分裂，熒光越弱

2、細胞周期檢測

處于不同細胞周期的細胞DNA含量不同，G0/G1期細胞含有二倍體量的DNA， G2/M期細胞含有四倍體量的DNA，而S期細胞的DNA含量處于二倍體和四倍體量之間。

DNA熒光染料能與DNA結合，DNA含量的多少與熒光染料的結合量成正比，熒光強度反應了DNA吸收熒光分子的多少。通過流式檢測就能反應細胞內DNA的含量，區別細胞周期的G0/G1、 S期和， G2/M期細胞的比例。

3、細胞周期分析核酸染料

細胞膜非通透性染料：PI（碘化丙叮）、EB（溴化乙啶），不能進入完整細胞膜，標記時需要通過固定等方法增加細胞膜的通透性。

細胞膜通透性染料：Hoechst、DAPI等能染活細胞的DNA，但需紫外激光激發。

4、增殖及細胞周期

增殖相關Mark:Ki67，Brdu，MCM2,PCNA。

5、Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡

正常細胞膜是不對稱的，胞漿面含有帶負電的磷脂（磷脂酰絲氨酸，PS）。早期凋亡時，細胞表面不對稱性發生改變，PS外翻到胞外側。

Annexin V是一種鈣離子依賴的對PS有高度親和力的磷脂結合蛋白，可作為探針識別膜表面是否有PS，從而識別凋亡細胞。

PI常用于鑒別死細胞。凋亡細胞的細胞膜仍然是完整的，所以PI不能進入早期凋亡細胞核內。

Annexin V:識別凋亡細胞

PI：識別死細胞