流式細胞儀免疫分析的技術有哪些要求呢

　　一、免疫檢測樣品制備

　　（一）新鮮實體組織單細胞懸液的制備：最常用的方法有機械法、酶處理法、化學試劑處理法和表面活性劑處理法等方法。

　　（二）單細胞懸液的保存：最常用的處理方法有三種：深低溫保存法，乙醇或甲醇保存法，甲醛或多聚甲醛保存法。

　　二、免疫分析中常用的熒光染料與標記染色

　　在流式細胞免疫分析技術中，被測定的信號參數主要包括散射光信號和熒光信號兩種，熒光信號來自于細胞的自發熒光或被分析細胞經特異性熒光標記染色后，在激光束激發下產生的發射光。因此，熒光染料的選擇和標記染色都是保證熒光信號產生非常關鍵的技術指標。

　　（一）免疫熒光標記最常用的熒光染料

　　用于免疫熒光染色的染料需具備以下幾個條件：

　　熒光染料應有較高的量子產額和消光系數；

　　熒光染料對488nm的激發光波長有較強的吸收；

　　發射光波長與激發光波長之間應有較大的波長差；

　　容易與被標記的單克隆抗體結合而不影響抗體自身的特異性。

　　1.異硫氰酸熒光素（FITC）：可產生亮綠色熒光。FITC是免疫熒光標記最常用的熒光探針。

　　2.德州紅：與生物素偶聯的抗體有很強的親和力，產生紅色熒光。

　　3.藻膽蛋白類：主要包括藻紅蛋白（PE）、藻青蛋白（PC）、別藻青蛋白（APC）三類。多發生橙色至紅色熒光。

　　4.能量傳遞復合染料

　　（二）免疫熒光標記

　　1.直接免疫熒光染色：特異性強，熒光標記干擾因素少

　　2.間接免疫熒光染色

　　3.雙參數或多參數分析時熒光抗體的組合標記

　　（三）細胞自發熒光

　　三、免疫膠乳顆粒技術的應用

　　“液相芯片”技術是膠乳顆粒在流式細胞分析中的應用，流式微球陣列（CBA）技術屬于其中的重要代表。

　　四、流式細胞免疫學技術的質量控制

　　（一）單細胞懸液制備的質量控制

　　1.采用適當的制備方式。

　　2.用溶血劑處理紅細胞。

　　3.實體組織來源標本在制備單細胞懸液過程中，最好采用機械法。

　　4.溫度與pH。

　　（二）細胞懸液免疫熒光染色的質量控制

　　1.溫度對熒光染色的影響。

　　2.pH對熒光發射強度的影響。

　　3.熒光染料濃度的控制。

　　固定劑對免疫熒光染色的影響。