水稻根尖質膜蛋白質組學研究方法的建立

摘　要: 以徐稻3 號水稻苗期幼嫩根尖為材料,利用葡聚糖/ 聚乙二醇兩相分配法純化得到純度達90 % 的質膜組分,使用優化的雙向電泳水化液溶解質膜蛋白,通過等電聚焦/ 十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳( IEF/ SDS2PAGE) 分離和基質輔助激光解吸電離串聯飛行時間質譜(MALDI2TOF/ TOF) 分析,鑒定了31 個水稻質膜相關蛋白。結果表明IEF/ SDS2PAGE 雙向電泳適合分離親水性相對較高的膜附著蛋白。進一步利用高鹽和溫和去污劑對純化的質膜進行洗滌,以降低質膜組分的復雜程度,通過SDS2PAGE 單向電泳分離和液相色譜串聯質譜(LC2MS/ MS) 分析,鑒定了8 個質膜蛋白。經洗滌后的質膜組分復雜度顯著降低,SDS2PAGE 中的蛋白條帶只包含1～2 種蛋白,且主要為疏水性較強的穿膜蛋白,說明多種生物化學分離方法及不同質譜分析的綜合運用,是解決生物膜蛋白質組學難點的有效途徑。