試劑、試劑盒 緩釋肥乙酰丁香酮
儀器、耗材 盆缽植物支撐器LB 培養基通用型試管YEP 固體培養基TSIM 培養基
實驗步驟
一、材料
1. 母體植株的生長
( 1 ) 將母體植株種植于 12 , 7F ( 直徑為 13 cm) 的盆缽中，每盆 4 株。
( 2 ) 用 Levingtons M2 培養土，并施用 5 g/L 奧綠專用緩釋肥（15 : 9 : 9+ 3 MgO + TE；釋放周期達 5~6 個月），并在介質表層鋪一薄層蛭石。
( 3 ) 用 Teku 植物支撐器（LBS Horticulture Colne Lancashire, UK) 來支撐植株。
( 4 ) 托盤中鋪上 Aquamat ( LBS Horticulture)，每盤放 6 罐（底部寬 30 cm、長 50 cm 的深礫石托盤）。
( 5 ) 由 Octamitters 控制澆水。
( 6 ) 所使用的生長箱是 Conviron PGV/PGW 36。
2. 小量甘油農桿菌制備法
需要準備以下材料：
( 1 ) LB 培養基（Sigma- Aldrich)
( 2 ) 通用型試管（25 mL，Sterilin)
( 3 ) 85 : 15 的 LB 培養基/甘油溶液（Sigma- Aldrich)
3. 農桿菌制備及接種
需要準備以下材料：
( 1 ) YEP 固體培養基：5 g/L 酵母提取物，10 g/L 蛋白胨，5 g/L NaCl，15 g/L 瓊脂，pH 6.8（以上均購自 Sigma- Aldrich) 。
( 2 ) TSIM 培養基：4.4 g/L MS 鹽和維生素（MP Biomedicals) , 100 mg/L 肌醇，10 g/L 蔗糖，500 mg/L MES 緩沖液（以上均購自 Sigma- Aldrich)，pH 5.2，過濾除菌。
( 3 ) 乙酰丁香酮（3 ,5 -diphenoxy- 4- hydroxyacetophenone) ( Sigma- Aldrich) ，0.1 mol/L 水溶液。
( 4 ) 25 μl 至 2.5 ml Hamilton 可重復使用的注射分液器（圖 7.1)。
( 5 ) Hamilton 注射器（50 μl），帶針頭。
( 6 ) 量筒（500 ml)
( 7 ) 玻璃棒或類似的支持物
( 8 ) 透明塑料袋（455 mmx 600 mm)
( 9 ) Sanyo 多功能環境監測箱
4. 組織培養
需要用到以下材料：
( 1 ) Domestos 漂白劑（Lever Bros)
( 2 ) 乙醇溶液（70% V/V)：以去離子水配制
( 3 ) 無菌去離子水
( 4 ) 帶 15 號刀片的手術刀（Swann-Morton，Sheffield，UK)
( 5 ) W4 培養基：4.4 g/L MS 鹽和維生素（MP Biomedicals) , 20 g/L 蔗糖（Merck KGaA，Germany) ，2 mg/L 2，4-D，鈉鹽（Sigma- Aldrich) ，500 mg/L 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich) , 100 mg/L 酪蛋白水解物（Sigma-Aldrich) ，6 g/L 1-A 型瓊脂糖（Sigma-Aldrich) ，150 mg/L 特美汀 ( ticarcillin disodium/potassium clavulanate) ( Melford Laborato ries Ipswich, UK)，pH 5.8 。表 7.1 列出了培養基添加劑的制備細節。
( 6 ) W425G 培養基：其余同 W4 培養基，額外加入 25 mg/L G418，重硫酸鹽 ( Sigma-Aldrich )。
( 7 ) MRM 培養基：4.4 g/L MS 鹽和維生素（MP Biomedicals) , 20 g/L 蔗糖（Merck KGaA, Germany) ，6 g/L 1-A 型瓊脂糖（Sigma- Aldrich)，2 mg/L 激動素 ( SigmaAldrich)， pH 5.8 。
( 8 ) MRM25G 培養基：其余同 MRM 培養基，額外加入 25 mg/L G418，重硫酸鹽 ( Sigma- Aldrich) 。
( 9 ) Beatson 廣口瓶（250 ml，Richardsons, Leicester, UK) 以有蓋培養皿的底作為蓋子，并以 25 mm 3M Micropore 的膠帶封口。
( 10 ) MS20 培養基：4.4 g/L MS 鹽和維生素（同前）， 20 g/L 蔗糖（Merck KGaA，Germany) , 7 g/L 經植物細胞培養測試過的瓊脂（Sigma- Aldrich)，pH 5.8 。
( 11 ) Sanyo 多功能環境監測箱。