梅毒螺旋體誘導巨噬細胞分泌的外泌體特征

　　為了探討梅毒螺旋體（Tp）體外誘導巨噬細胞分泌的外泌體特征及其對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）增殖水平的影響，中國醫學科學院 許卜方、王千秋等人自雄兔睪丸分離Tp。將人單核巨噬細胞（THP-1）誘導為巨噬細胞后，分為實驗組（Tp刺激）和對照組（不用Tp刺激），12 h后繼續培養48 h，收集巨噬細胞外泌體懸液，利用差速離心法和膜親和試劑盒提取外泌體，運用透射電鏡、Western印跡鑒定外泌體，Nanoparticle tracking analysis（NTA）粒徑分析儀定量分析外泌體。將HUVEC分為實驗組、對照組和外泌體洗脫液組，分別用外泌體懸液（4.5 × 108顆粒，實驗組和對照組）、外泌體洗脫液刺激培養一定時間后，激光共聚焦掃描顯微鏡觀察HUVEC對外泌體的吞噬，CCK8法檢測HUVEC增殖活性。

　　結果發現：透射電鏡下的外泌體呈杯托樣，為直徑30 ~ 100 nm的微小囊泡。Western印跡顯示，外泌體豐富表達膜蛋白CD63、CD9和CD81。相同實驗條件下，NTA測定顯示，實驗組與對照組外泌體粒徑（u = 1.90，P > 0.05）、濃度（z = -1.604，P = 0.109）差異均無統計學意義。兩組外泌體分別與HUVEC共培養5 h后，激光共聚焦顯微鏡下見胞內散在分布被吞噬的綠色熒光外泌體。實驗組、對照組外泌體分別作用于HUVEC 12 h后細胞增殖水平均高于外泌體洗脫液組，差異均有統計學意義（P < 0.05）；在24 h和48 h時對照組細胞增殖水平仍高于外泌體洗脫液組，在48 h達到峰值（P < 0.05），實驗組細胞增殖水平趨于正常；在72 h時實驗組、對照組細胞增殖水平與外泌體洗脫液組差異無統計學意義（P > 0.05）。

　　THP-1來源的巨噬細胞分泌的外泌體在48 h內能顯著提高HUVEC細胞增殖水平，在48 h達到峰值。在Tp刺激下，THP-1來源的巨噬細胞分泌的外泌體在形態、大小、濃度上與無Tp刺激巨噬細胞分泌的外泌體相似，但僅在短時間（12 h）內提高HUVEC增殖水平。