流式細胞術是利用流式細胞儀對處在快速、直線、流動狀態中的單細胞單顆粒進行多參數、快速定量分析,同時對特定群體加以分選的現代細胞分析技術。利用高速采集記錄系統可觀測并記錄流式細胞術對單細胞逐個進行高速準備的定量分析和分類,每秒測試數千到萬個細胞的整個過程。這種高速信息的測量分析和高純度分類新技術,為細胞生物學提供了一種強有力的研究手段。
1 流式細胞儀的工作原理
流式細胞儀用于檢測單細胞或微粒的信號,一般是將待測細胞或微粒進行熒光染色后制成懸液標本,在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動室,不含細胞或微粒的緩沖液(又稱鞘液)在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管入口方向與待測細胞或微粒流成一定角度,使鞘液包繞著細胞或微粒高速流動,形成一個圓形的流束(即鞘流),待測細胞在鞘液的包裹下單行排列,依次通過流式細胞儀的檢測區域。激發光源經過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細胞在激光束的照射下產生激發熒光,同時產生散射光。這兩種光信號被在 90°方向的光電倍增管熒光檢測器和前向角光電二極管散射光檢測器接收,經光電倍增管接收后可轉換為電信號,再通過 A/D 轉換器,將轉換來的電信號轉換為數字信號輸送給計算機。計算機將各種數字信號進行計算處理后,得到相應的細胞大小、活性、細胞內細胞因子、DNA含量和細胞周期、核糖核酸(RNA)含量、酶和抗原的性質等參數。
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