游離小孢子培養是在花藥培養的基礎上發展的培養技術。把小孢子從花藥中分離出來，進行人工培養，稱為小孢子培養，或游離小孢子培養，有時也稱花粉培養。與花藥培養相比，小孢子培養排除了花藥壁和絨粘層的影響，便于分析研究結果。
高等植物的小孢子母細胞通過減數分裂形成小孢子，小孢子分裂形成生殖細胞和營養細胞后即成為雄配子體，通常我們把小孢子和雄配子體統稱為花粉。
花粉的發育時期依次分成如下幾個階段：單核早期、單核中期、單核晚期、第一次有絲分裂期、雙核期、第二次有絲分裂期和花粉成熟期。嚴格地講，小孢子只包括四分體解離后至第一次核有絲分裂時期的細胞。在培養中，小孢子包括的范圍更廣泛，雙核期的花粉有時也作為離體培養的對象 。