材料和試劑
1. 蛋白酶K（羅氏03115836001）
2. 1M的Tris，pH值8.3
3. 氯化鉀
4. 吐溫20（10％，EMD4 biosciences，655207）
5. NP40（10％，Merck，492018）
設備
1. PCR儀
2. 離心機
3. 孵化器
步驟
1. 冷凍單活胚胎
1) E3洗滌dechorionated胚胎3X。
2) 將一個單個的胚胎放入一個96孔板，并移除所有多余的緩沖液。
（如果需要，干燥保存于-20°C）。
2. DNA的制備：
1) 添加50μl裂解液到單個的胚胎（活體或在situ'd）。
2) 在98 °C孵育10分鐘裂解細胞。自旋向下。
3) 加入5μl蛋白酶K（10 mg / ml的儲存液）到單個的胚胎。
4) 在55 °C孵育至少2個小時（長與孵育期，清除DNA）
5) 在98 °C孵育至熱滅活蛋白酶K
6) 渦旋徹底和自旋出現碎片。
7) 單個胚胎的DNA 每次PCR rxn使用2μl。
配方
1. 1X PCR緩沖液：
配制50 ml：
10 mM的Tris - HCl pH值8.3（500μl 1M的Tris（pH值8.3）
50 mM氯化鉀（2.5 ml的1 M氯化鉀）
無菌水47 ml
（可在室溫下保存幾個月）
2. 胚胎細胞裂解液：（含有吐溫20和NP40的1X PCR緩沖液）
配制10 ml裂解緩沖液中：
1X PCR緩沖液9.4 ml
300μlNP40（10％的儲存液）***現用
300μl tween20（10％的儲存液），現配***
3. E3
60X E3的股票（2L）
34.4克氯化鈉
1.52克氯化鉀
5.8克CaCl2.2H2O
9.8克MgSO4.7H2O
加蒸餾水至2000 ml
儲存在室溫下。
飼養斑馬魚時稀釋成1X，使用160 ml的儲存液，并填加ddH2O至10L。 (責任編輯：大漢昆侖王) | 