（３）分離B與F：每管加入2%加膜活性炭溶液300μl，搖勻，立即離心，去上清，測沉淀（F）的CPM數。
（二）順序飽和加樣程序
1、基本原理
先將標準物或血樣品與抗血清混勻，免疫反應6～24h，使抗原與抗體充分結合，甚至達到平衡，然后再加入標記抗原，與抗體反應12～24h，最后分離B與F，這稱為順序飽和分析法。
應用順序飽和加樣，可以提高測定方法的靈敏度。Utiger在做人促甲狀腺激素（TSH）放射免疫分析時，將標記物延至第2天加入，發現其靈敏度增加兩倍。如果縮短最后的溫育時間，仍可取得滿意的結果。所以一般認為，在順序飽和加樣中，第1次溫育時間可以長，而第2次溫育時間要短，這樣可以提高靈敏度。
但也有相反的意見，認為順序飽和加樣，是使用過量抗體，會使靈敏度受到一定影響。如果使用抗體不過量，溫育時間縮短，在抗原和抗體結合未達到平衡飽和時就加入標記物，這樣既不影響加靈敏度，反而比較穩定，甚至可提高靈敏度。
2、加樣程序 以人血漿精氨酸加壓素RIA測定程序為例（直接測定）。
（１）加樣（單位μl；總反應體積600μl）
| 標準曲線 | 血漿 | |||||||||
| T | NSB | Bo | 1Pg | 5Pg | 10Pg | 50Pg | 100Pg | 500Pg | ||
| 管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| AVP標準液 | / | / | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | / |
| 樣品 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | 300 |
| 無肽血漿 | / | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | / |
| AVP抗血清 | / | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 緩沖液 | / | 200 | 100 | / | / | / | / | / | / | 100 |
| 在4。C下孵育12～24h | ||||||||||
| 125I-AVP | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
（２）孵育：4℃，24h。
（３）分離B與F。
無肽血漿，用于血漿的直接測定。其制備方法為：在電磁攪拌下，抽取2%加膜活性炭溶液5ml，共兩管，離心、去上清。血漿5ml，倒入上述活性炭管中，加蓋，充分振蕩10min，離心，上清倒入上述另一活性炭管中，振蕩10min，再離心，取上清，即無肽血漿。血漿中的生物活性物質被活性炭吸附而去除。
（三）計數、繪制標準曲線與測定樣品含量
以活性炭分離B與F，沉淀計數是F的cpm。T—F—NSB，得B的cpm數。計算標準管與樣品管結合（B）的cpm數及與零標準管結合（B0）的比（B/B0×100%）。用半對數紙，以標準管的B/B0為縱座標，以各標準管含量為橫座標，繪制標準曲線。根據樣品的結合率（B/B0×100%），從標準曲線中找出被測樣品抗原的含量，再換算成每毫升血漿含某抗原的量，或每毫克（組織濕重）含某抗原的量。
三、放射免疫分析的質量控制
（一）質量控制的目的和內容
放射免疫分析的質量控制實際上就是控制測定誤差，監督測定結果。它包括兩方面的內容：一方面對測定結果做精確分析；另一方面鑒定常規測定方法，對那些測定結果不好的方法加以改進，并建立新的測定方法。質量控制分四個方面：
1、在一個測定方法內產生的誤差。
2、在同一實驗室內不同方法之間產生的誤差。
3、用同一測定方法，在各實驗室之間產生的誤差。
4、采用不同方法，在各實驗室之間產生的誤差。
后兩種情況屬于外部質量控制。
（二）放射免疫分析中造成測量誤差的因素
誤差包括系統誤差和隨機誤差。系統誤差發生在測量過程中由于儀器不準、試劑不純、標準品不穩定等原因，使測定結果呈傾向性偏大或偏小，這種誤差應力求避免。隨機誤差是測量過程中各種偶然因素造成的，沒有固定的傾向性，這類誤差是不可避免的，必要時做統計學處理。
造成誤差的可能來源有以下幾個方面：
1、各種儀器：設備的準確性、穩定性、效率以及被污染等情況帶來的誤差。如：①由于放射性測量儀器的穩定性、效率、樣品試管的材料和均勻性及被測物的放射性強度等原因。②由于樣品的自吸收，本底校正，測定時間，可能的污染等原因。③在試驗室中所有的移液管、微量取樣器以及天平的刻度、校準和使用方法等原因。④由于反應試管、移液管以及測定用試管等表面清潔度和所引起的不同吸附等原因都可以對測定結果帶來誤差。
2、試劑的純度、質量和穩定性的影響也是造成誤差的重要因素。如標記抗原的比度、純度，輻射自分解，抗體的穩定性，分離劑、阻斷劑及緩沖液等試劑的純度等。
3、在放射免疫分析中一些基本操作，如取樣、提取、沉淀、分離以及保溫條件不適當等造成的誤差。由于工作人員熟練程度不同也常常帶來誤差，如操作移液管垂直程度、下流速度、吹氣與不吹氣等。工作人員草率、不按規程操作等也都可以造成誤差。
4、樣品誤差。樣品的收集方法、貯存溫度、放置條件，微量樣品取樣的準確度，樣品可能造成的污染以及樣品的變性（如免疫反應活性的降低、蛋白質的變性等）也都能造成測量的誤差。
5、提取及層析分離過程中的丟失。
（三）放射免疫分析中測量誤差的控制
1、選擇準確性高的方法：對各種方法進行比較，淘汰粗糙及難以重復的方法。
2、建立方法對比。用相同的測量方法和不同的測量方法在同一實驗室和不同實驗室，在同一地區和不同地區，在同一時間和不同時間，對同一樣品進行對比，檢查產生誤差的原因。
3、建立各種類型的標準。對標準品應規定純度及制備方法，使用年限及貯存條件。
4、建立操作規程，按章 操作。對使用的試劑、儀器設備要經常檢查其有效性，更換試劑時應進行必要的鑒定，必要時對測定方法要做重復性試驗和回收試驗。
5、建立可靠的檢查制度。經常對測定結果進行核查，利用控制血清、標準血清檢查每批結果的準確性