三、抗腫瘤藥物篩選及評價
以國立腫瘤研究所（Nationai Cancel Institute NCI)為代表的美國抗腫瘤藥物篩選模式經歷了三個發展階段。
? 1955-1985年，以動物移植性腫瘤為基本模型，以動物生命延長率和瘤重抑制率為藥物活性的基本評價指標，此階段是以化合物為本位的體內篩選方法。
? 1985-1990年，NCI提出并在廣泛研究和試點的基礎上逐漸完善以人腫瘤細胞株為基礎、疾病本位的體外抗腫瘤藥物篩選模型。這階段是新舊篩選模型并存，新的篩選體系逐漸取代舊篩選體系的過渡階段。
? 1990-至今，以人腫瘤細胞株為基礎、疾病本位的體外抗腫瘤藥物篩選體系，其目的在于發現對某種組織類型腫瘤活性強但可能對其他組織類型腫瘤活性弱的化合物。在該體系中，樣品先經過9大類60種人類腫瘤細胞株進行體外篩選，結果通過評估后，再進行裸鼠體內的人類腫瘤異種移植研究。
國內抗腫瘤藥物篩選和研究體系雖與NCI相似，但也形成了自己的特點。
?根據我國腫瘤發病情況，選擇試驗瘤株組成，主要選擇白血病、肺癌、胃癌、結腸癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌等細胞株，相當一部分是細胞株是國內自己建的。
?體外抗瘤譜試驗選用了正常細胞株，綜合考慮了受試樣品對正常組織的毒性。
?選用了人腫瘤耐藥細胞株，測試受試樣品的耐藥逆轉作用和耐藥細胞株增殖的直接抑制作用，以期發現具有抗耐藥作用的藥物。
?選用人血管內皮細胞株進行同步體外試驗，初步考察受試樣品是否具有血管生成抑制作用。
抗腫瘤藥的臨床前藥理研究包括藥效學和毒性研究兩部分
抗腫瘤藥物藥效學需研究內容：
體外抗腫瘤試驗、體內抗腫瘤試驗
評價藥物的抗癌活性時，以體內試驗結果為主，同時參考體外試驗結果以做出正確的結論。
四、體外抗腫瘤活性試驗
目的：
?對候選化合物進行初步篩選；
?了解候選化合物的抗瘤譜；
?為隨后進行的體內抗腫瘤試驗提供參考，如劑量范圍、腫瘤類別等 。
體外試驗常用方法有：
1、染料排斥法
試驗原理：活細胞有排斥某些染料如伊紅、臺盼藍、苯胺黑等的能力，而死細胞由于膜完整性的破壞，可被著色。因此培養的腫瘤細胞中加入這些染料，一定時間后，對著色和未著色的細胞進行計數，即可算出被殺死的細胞比例。
方法要點：向一定容積的待檢細胞懸液加入定量的某種染液，最常用的是0.4%臺盼藍液，混勻，室溫染色5-15min，將已染色的細胞懸液滴加至血細胞計數板，直接在光鏡下計數活細胞數和細胞總數。
觀測指標：按（未染色細胞數/細胞總數）X100%計算活細胞率，對照組活細胞率應在90%以上。根據活細胞率計算受試樣品的半數致死劑量（IC50）作為藥物抗腫瘤活性的指標。
2、四氮唑鹽還原法
試驗原理：四氮唑[MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide]是一種能接受氫原子的染料。活細胞線粒體中與NADP相關的脫氫酶在細胞內可將黃色的MTT轉化成不溶性的藍紫色的甲[月替] (formazan)，而死的細胞則無此功能。用二甲基亞諷(DMSO)溶解甲[月替]后，在一定波長下用酶標儀測定光密度值，即可定量測出細胞的存活率。
方法要點：受試樣品處理細胞結束后，加入5mg/ml MTT液20微升/孔，繼續培養四小時。再加三聯液并培養過夜。在酶標儀上于570nm波長處檢測OD值。
觀測指標 直接指標為96孔板上各被測孔的OD值；然后按公式（對照組OD值-治療組OD值）/對照組OD值×100%計算出相應的細胞生長抑制率；劇情況可進一步采用Logit法計算50%生長抑制濃度IC50值。
3、阿拉馬藍法
試驗原理：非熒光性藍色底物阿拉馬藍可被活細胞中的線粒體內的NADPH相關的脫氫酶類還原為強熒光性粉紅色底物，采用微培養板自動讀數儀在激發與發射波長分別為530nm和590nm處讀取熒光強度值，與活細胞數呈良好的線性關系。
方法要點：細胞經受試樣品處理后，加入10-20ul阿拉馬藍染液，繼續培養一定時間，用微培養板自動讀數儀在激發與發射波長分別為530nm和590nm處讀取熒光強度值。
觀測指標：根據熒光強度可以計算細胞生長抑制率，適當時可進一步計算IC50值。