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    發布時間:2019-04-11 17:22 原文鏈接: 技術和方案13已固定細胞的肌動蛋白染色

    試劑、試劑盒

    PBS固定液

    實驗步驟

    鬼筆環肽專一性地結合 F 肌動蛋白,熒光標記的鬼筆環肽染細胞與肌動蛋白抗體的染色模式類似。

    1.在 500 ml 三角瓶中振蕩培養 25 ml 酵母菌至密度為 2X107 個/ml。

    2.添加 17 ml 10% 甲醛(EM 電子顯微級)到培養基中至終濃度 4%,在酵母菌生長溫度下固定細胞 10 min。

    3.2000~3000r/min 離心 5 min,收集細胞。

    4.在 6 ml 加了 4 ml 10% 甲醛(EM 級)的 PBS 溶液中室溫固定細胞 lh。

    5.用 10 ml PBS 洗細胞兩次,重懸在 500ul PBS 中。

    6.取 180ul 細胞懸液,添加 20ul 羅丹明鬼筆環肽或熒光素鬼筆環肽。避光溫育 lh,每融 15 mm 輕輕混合。

    7.用 1ml PBS 洗細胞 5 次。

    8.懸浮細胞在約 200ul 免疫熒光固定液中。放置于 -20°C,染色細胞可以保存幾個月。

    9.觀察細胞時,滴 1ul 細胞懸液在蓋玻片下,通過毛細管作用細胞液能鋪滿玻片。確保玻片清潔。

    展開


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