徠卡冰凍式切片機切片制樣方法

電鏡樣品制備技術直接影響樣品的結構和反差。制備高質量的超薄切片，是發揮透

射電子顯微鏡優良性能的前提。透射電子顯微鏡的分辨率理論上可達到o．3nm左右，

但是六于樣品制備技術的限制，分辨率很難達到理論值。對于生物樣品來說，一般只能

達到2nm的水平。

高質量的超薄切片基本特征：①樣品應該能耐受電子束的強烈照射．不變形和升華

等。②能進行屯了染色．提高反差。③l50一100kv加速電壓范圍內，切片厚度在

50—loonm。④樣品必須徹底下燥，以保持電鏡L作狀態F不損傷。

超揍切片技術包括取樣、固定、脫水、滲透、包埋、超薄切片、電子染色、鏡檢等

制樣步驟。其中取樣、固定、脫水、滲透、包埋等過程與半博團片制樣方法相同，下面

重點介紹超薄切片的準備、超薄切片和電子染色等過程。

一、徠卡冰凍式切片機切片制樣步驟

1．銅網清洗：超薄切片要放在載網上才能進行染色等操作，并zui終放到電鏡中觀察。載網是用元磁性金屬材料做成的，厚50Pm，直徑一般為3咖，也有2皿的。一般用銅材料，所以又叫銅網。在酶組織化學或免疫細胞化學中要用金網和鎳網，載網有各種形狀。可根據樣品和實驗需要，選擇載網的材質、形狀和孔眼的大小。銅網主要功能是承載支持膜和樣品。當受到電子束照射時，支持膜不易破裂*照射到銅網網孔中的電子，穿過樣品，通過透鏡成像。碰到銅網載條上的電子，被傳到地，不參與成像，因此銅網還有把樣品上的熱量傳走，減少樣品的熱漂移。銅網要經過清洗，方可使用。目前清洗的方法主要有下列幾種：①超聲波清洗法：將用過的銅網放在盛有95％乙醇的燒杯里，置于超聲波清洗器（其內有水）中，在800一1000w下清洗30min。將使用過的銅網上的支持膜及超薄切片等洗去。然后用蒸餾水清洗數次，再在95％乙醇中清洗，zui后放在墊有干凈濾紙的培養皿中烘干．鏡檢，備用。②酸堿清洗法：將用過的銅網放在一培養皿中，倒入一些濃硫酸或濃鹽酸，不斷地搖動（3—5min），直到銅網發亮為止。然后先用自來水，后用蒸餾水洗幾次，再放在95％乙醇中清洗，zui后放到墊有干凈濾紙的培養皿中烘下，鏡檢，備用。也可將銅網放在盛有10％NaoH的小錐瓶或試管中煮沸數分鐘，然后用水洗，干燥、鏡檢，備用。